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Tessuto
Embrione
Malattia
Normale
Sito metastatico
Embrione (fase di chiusura dorsale)
Sinonimi
KC, K C

Documenti

KC

Cell line · Codice prodotto 300604

KC (Kc167) è una linea cellulare embrionale di Drosophila melanogaster derivata da un embrione femminile allo stadio di chiusura dorsale. La linea è stata originariamente istituita e ha...

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1

01Informazioni generali

Descrizione

KC (Kc167) è una linea cellulare embrionale di Drosophila melanogaster derivata da un embrione femminile allo stadio di chiusura dorsale. La linea è stata originariamente istituita ed è stata ampiamente utilizzata nella biologia cellulare della Drosophila, negli screening genetici e nella genomica funzionale. Le cellule Kc167 sono state immortalizzate con SV40 e crescono in modo semi-aderente, formando una popolazione mista di cellule attaccate e cellule che galleggiano liberamente. Sono tra le linee cellulari di Drosophila meglio caratterizzate e sono pienamente suscettibili al silenziamento genico mediato da RNAi, il che le rende un modello fondamentale per gli screening di RNAi a livello genomico nella biologia degli invertebrati.

Le cellule KC trovano applicazione nella biologia cellulare della Drosophila, negli screening a livello genomico basati su RNAi e CRISPR, negli studi sulle vie di trasduzione del segnale (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB), nella ricerca sull’immunità innata e negli studi comparativi sulle vie conservate evolutivamente. Il genoma della Drosophila, completamente sequenziato e annotato, combinato con ampie banche dati pubbliche di reagenti RNAi (ad es. DRSC/TRiP), rende le cellule KC particolarmente efficaci per la scoperta genomica funzionale imparziale. A causa dell’immortalizzazione con SV40, si applica la classificazione BSL-2.

Tessuto
Embrione
Malattia
Normale
Sito metastatico
Embrione (fase di chiusura dorsale)
Applicazioni
Biologia cellulare della Drosophila; screening RNAi su scala genomica; screening CRISPR; trasduzione del segnale (Wnt/Wingless, Hedgehog, Notch, JAK/STAT, Toll/NF-κB); immunità innata; genomica funzionale degli invertebrati
Sinonimi
  • KC
  • K C

02Classificazione

Organismo
Mosca della frutta
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S2
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S2: This Drosophila cell line contains a stably integrated SV40 immortalization cassette. BSL-2 containment is required. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
2

03Caratteristiche

Morfologia
Di tipo epiteliale semi-aderente
Tipo di cellula
Cellule embrionali
Tempo di raddoppio
circa 24-48 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
KC (codice catalogo Cytion 300604)
Codice fiscale NCBI
7227
Cellosaurus
CVCL_Z833

05Espressione e suscettibilità

Suscettibilità ai virus
SV40 immortalato

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
Terreno di coltura Schneider per Drosophila + 2 mM di glutammina + 10% di siero fetale bovino (FBS).
Atmosfera di incubazione

25 °C, aria ambiente (non è necessaria la CO₂).

Integratori
Aggiungere al terreno di coltura 2 mM di glutammina e il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Non necessario (semi-aggregato; risospendere delicatamente)
Subcoltura
Pipettare delicatamente la coltura per risospendere le cellule semi-aderenti. Trasferire un volume adeguato in una nuova fiasca e aggiungere terreno di Schneider fresco e preriscaldato. Diluire fino a raggiungere una densità compresa tra 5 × 10⁵ e 1 × 10⁶ cellule/ml. Incubare a 25 °C in aria ambiente senza CO₂.
Rapporto di frazionamento
da 1 a 3
Densità di semina
da 5 × 10⁵ a 1 × 10⁶ cellule/ml
Rinnovo dei fluidi
Ogni 2 o 3 giorni
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
Fase di chiusura dorsale