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BRL-3A
Tessuto
Fegato
Sinonimi
BRL3A, BRL 3A, Buffalo Rat Liver-3A

Documenti

BRL-3A

Cell line · Codice prodotto 500129

The BRL-3A cell line is derived from the normal liver of a male Buffalo rat. Established in 1976, this cell line is an important in vitro model primarily ...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare BRL-3A deriva dal fegato normale di un ratto Buffalo maschio. Fondata nel 1976, questa linea cellulare è un importante modello in vitro utilizzato principalmente per studiare la funzione degli epatociti, i meccanismi di rigenerazione epatica e l'epatotossicità. Le cellule BRL-3A conservano diverse caratteristiche degli epatociti primari, tra cui la capacità di sintetizzare albumina e altre proteine del siero, il che le rende uno strumento prezioso nella ricerca epatologica. Queste cellule presentano una morfologia simile a quella epiteliale e sono aderenti con un elevato tasso di crescita in coltura.

L'interesse scientifico per le BRL-3A si estende alla loro applicazione nello studio delle infezioni virali specifiche del fegato, del metabolismo dei farmaci e degli effetti di vari fattori di crescita e citochine sulle cellule epatiche. I ricercatori utilizzano le cellule BRL-3A anche per studiare l'impatto di tossine e agenti cancerogeni sulla funzione epatica, fornendo approfondimenti sull'epatocarcinogenesi e sulle lesioni epatiche. Le cellule sono note per la loro capacità di rispondere ai proliferatori dei perossisomi e sono state utilizzate per testare l'efficacia e la sicurezza di farmaci potenzialmente in grado di influenzare la funzione epatica.

Tuttavia, nonostante la loro versatilità, gli utilizzatori della linea cellulare BRL-3A devono considerare le limitazioni inerenti a un modello non umano, poiché i risultati non sempre si traducono direttamente nella fisiologia epatica umana. Questo fattore sottolinea l'importanza di corroborare i risultati con altri modelli e approcci sperimentali.

Tessuto
Fegato
Sinonimi
  • BRL3A
  • BRL 3A
  • Buffalo Rat Liver-3A

02Classificazione

Organismo
Ratto
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Identificatori

Riferimento bibliografico
BRL-3A (numero di catalogo Cytion 500129)
Codice fiscale NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_0606

04Espressione e suscettibilità

Prodotti
Attività di stimolo alla moltiplicazione (MSA).

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
Ham's F12, w: 1,0 mM di glutammina stabile, w: 1,0 mM di piruvato di sodio, w: 1,1 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820600a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Si raccomanda una densità di semina di 1 x 104 cellule/cm2.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.