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CDNR4
Tessuto
Seno
Malattia
Adenocarcinoma

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CDNR4

Cell line · Codice prodotto 400391

The CDNR4 cell line comprises a specialized subset originating from the COMMA-D cell line, known for modeling mouse mammary carcinoma. This clonal subpopu...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare CDNR4 comprende un sottogruppo specializzato proveniente dalla linea cellulare COMMA-D, nota per aver modellato il carcinoma mammario di topo. Questa sottopopolazione clonale è stata sottoposta a un'ampia caratterizzazione, che ha rivelato una serie di proprietà e funzionalità uniche. Una delle caratteristiche più evidenti delle cellule CDNR4 è la loro somiglianza con le cellule staminali mammarie, che le rende una risorsa importante per esplorare aspetti della biologia delle cellule staminali, della carcinogenesi e dell'eterogeneità cellulare all'interno delle popolazioni. Queste cellule sono state sviluppate attraverso la trasfezione di un trasposone con geni di resistenza alla kanamicina e alla neomicina (gene Tn5), che ha portato all'emergere di diverse caratteristiche e capacità intriganti, tra cui il loro potenziale di differenziazione in fenotipi sia preneoplastici che neoplastici.

Proveniente dalla linea COMMA-D, che è stata inizialmente studiata per la sua eterogeneità cellulare utilizzando una serie di tecniche come la microscopia a contrasto di fase, le colorazioni immunocitochimiche, l'analisi del contenuto di DNA e le valutazioni del potenziale oncogeno, CDNR4 si distingue come clone distinto. Attraverso metodi specifici di trasfezione e selezione, sono state isolate sottopopolazioni clonali come CDNR4, ognuna delle quali ha mantenuto un certo grado di eterogeneità rispetto alle cellule parentali COMMA-D originali. Questo mantenimento dell'eterogeneità sottolinea la natura complessa di queste popolazioni cellulari e accresce il valore delle cellule CDNR4 nella ricerca incentrata sulla differenziazione cellulare e sulla progressione del cancro.

Tessuto
Seno
Malattia
Adenocarcinoma

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Identificatori

Riferimento bibliografico
CDNR4 (numero di catalogo Cytion 400391)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5719

04Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Si raccomanda 2 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

05Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

06Donatore

Età dei donatori
1 anno