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SK-NEP-1
Tessuto
Rene
Malattia
Tumore di Wilms
Sito metastatico
Versamento pleurico
Sinonimi
SKNEP-1, SKNEP1, SKNEP

Documenti

SK-NEP-1

Cell line · Codice prodotto 300341

SK-NEP-1 is a human cell line originally derived from a nephroblastoma, also known as Wilms' tumor, a common pediatric renal malignancy. This cell line ha...

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01Informazioni generali

Descrizione

SK-NEP-1 è una linea cellulare umana originariamente derivata da un nefroblastoma, noto anche come tumore di Wilms, una comune neoplasia renale pediatrica. Questa linea cellulare è stata ampiamente utilizzata nella ricerca preclinica per studiare la biologia del nefroblastoma e per valutare nuovi approcci terapeutici per il trattamento del tumore di Wilms. Tuttavia, caratterizzazioni molecolari successive hanno rivelato che SK-NEP-1 esprime il gene di fusione EWS-FLI1, caratteristico del sarcoma di Ewing, indicando che questa linea cellulare è più rappresentativa della famiglia dei tumori di Ewing piuttosto che del tumore di Wilms. Questa scoperta ha importanti implicazioni per l'interpretazione delle ricerche passate che hanno utilizzato SK-NEP-1, in quanto le sue caratteristiche biologiche sono più vicine al sarcoma di Ewing che al tumore anaplastico di Wilms.

Le ricerche condotte su SK-NEP-1 hanno dimostrato che è sensibile ad agenti chemioterapici come la vincristina, che inibisce la polimerizzazione dei microtubuli, portando all'arresto della fase G2/M e all'apoptosi. Inoltre, le terapie combinate che utilizzano composti naturali come l'andrografolide hanno dimostrato effetti sinergici nell'aumentare la citotossicità della vincristina sulle cellule SK-NEP-1, principalmente attraverso la via di segnalazione PI3K-AKT-p53. Questa combinazione ha dimostrato di indurre l'apoptosi nelle cellule SK-NEP-1, sia in vitro che in vivo, rendendolo un approccio promettente per il trattamento dei tumori che condividono le caratteristiche molecolari di SK-NEP-1.

SK-NEP-1 è quindi un modello fondamentale per studiare le basi molecolari dei tumori renali pediatrici e del sarcoma di Ewing e per valutare l'efficacia delle combinazioni di farmaci volte a migliorare i risultati terapeutici in questi tipi di tumore. Il suo utilizzo nella ricerca ha contribuito a comprendere l'apoptosi indotta dai farmaci e il potenziale del targeting di specifiche vie di segnalazione come PI3K-AKT-p53 nella terapia del cancro.

Tessuto
Rene
Malattia
Tumore di Wilms
Sito metastatico
Versamento pleurico
Sinonimi
  • SKNEP-1
  • SKNEP1
  • SKNEP

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Sospensione
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tumorigenico
Sì, in topi nudi.
Cariotipo
(P12) da ipotriploide a ipertriploide (+A1, +A2, +C, +D, +E, +F, +G) con anomalie che includono frammenti acrocentrici, restringimenti secondari e grandi marcatori sub telocentrici

04Identificatori

Riferimento bibliografico
SK-NEP-1 (numero di catalogo Cytion 300341)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0631

05Espressione e suscettibilità

Isoenzimi
PGM3, 1, PGM1, 1-2, ES-D, 1, Me-2, 2, AK-1, 1, GLO-1, 2, G6PD, B, Prodotto di frequenza del fenotipo: 0.0029
Profilo mutazionale
P53 mut

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
McCoys 5a, w: 3,0 g/L Glucosio, w: Glutammina stabile, w: 2,0 mM Sodio piruvato, w: 2,2 g/L NaHCO3 (articolo Cytion numero 820200a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Subcoltura
Mantenere le colture aggiungendo o sostituendo periodicamente il terreno. Avviare le colture con una densità di 5 x 105 cellule/ml e mantenere la concentrazione cellulare compresa tra 3 x 105 e 1 x 106 cellule/ml per una crescita ottimale.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
25 anni
Etnia
Caucasico