Pāriet uz saturu
Meth A sarcoma
Audums
Āda
Slimība
Fibrosarkoma
Sinonīmi
Meth A, Meth-A, Meth-A-sarkom

Dokumenti

Meth A sarcoma

Cell line · Preces numurs 400284

Meth A sarcoma cells, originating from a chemically induced tumor in Balb/c mice, provide a crucial model for understanding tumor biology and the molecula...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

Meth A sarkomas šūnas, kas iegūtas no ķīmiski inducēta audzēja Balb/c pelēm, ir svarīgs modelis audzēja bioloģijas un molekulāro mehānismu, kas nosaka sarkomas attīstību, izpratnei. Meth A sarkomas šūnu izpētes galvenais aspekts ir ar transformāciju saistītā proteīna p53 izpēte, kas ir pazīstams ar savu lomu audzēju nomākšanā. Parasti p53 ir ļoti labils, bet tā stabilitāte ir ievērojami palielināta daudzās fibrosarkomu šūnu līnijās, kas iegūtas no audzējiem, kurus izraisījuši fizikāli vai ķīmiski līdzekļi. Šī stabilizācija bieži korelē ar stabila kompleksa veidošanos ar siltuma šoka proteīna hsc70 radinieku.

Interesanti, ka Meth A sarkomas šūnām ir unikāla p53 stabilitātes uzvedība. Lai gan p53 šajās šūnās ir ļoti stabils, mijiedarbība ar hsc70 nav konstatējama. Tas liecina, ka nespēja veidot šādu kompleksu, iespējams, ir saistīta ar endogēnā p53 primāro struktūru. Ja Meth A sarkomas šūnās ievada citus p53 variantus, p53-hsc70 komplekss veidojas, kas norāda, ka p53 primārā struktūra ir izšķirošs faktors, kas nosaka tā mijiedarbību ar hsc70 un līdz ar to arī tā stabilitāti.

Turpmāki pētījumi, izmantojot stabilas transfekcijas eksperimentus, atklāja, ka dažādi p53 varianti dažādos transformēto šūnu tipos noārdās atšķirīgi ātri, uzsverot p53 primārās struktūras nozīmi, nosakot tā aprites ātrumu. Turklāt arī šūnu vide ietekmē p53 stabilitāti, par ko liecina atšķirīgais vismaz viena p53 varianta degradācijas ātrums netransformētās BALB/c-3T3 šūnās salīdzinājumā ar transformētām fibrosarkomas šūnām. Tas norāda uz sarežģīto mijiedarbību starp ģenētiskajiem faktoriem un šūnu kontekstu, regulējot p53 stabilitāti un funkciju Meth A sarkomas šūnās.

Audums
Āda
Slimība
Fibrosarkoma
Sinonīmi
  • Meth A
  • Meth-A
  • Meth-A-sarkom

02Klasifikācija

Organisms
Pele
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atsperes
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Apaļas šūnas
Tumorogēns
Jā
Laiks, kas nepieciešams, lai skaits dubultojās
28 līdz 30 stundas

04Identifikatori

Atsauce
Meth A sarkoma (Cytion kataloga numurs 400284)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10090
Cellosaurus
CVCL_5798

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Pārstādīšana
Ļaujiet šūnu agregātiem nogulsnēties kolbas dibenā, izlejiet virsējo šķidrumu, izkliedējiet šūnas ar vieglu pipetēšanu un pārlejiet jaunās kolbās. Atkārtoti suspendējiet šūnu suspensiju kolbā un ņemiet reprezentatīvu alikvotu, lai skaitītu šūnu skaitu uz ml. Atšķaidiet šūnu suspensiju līdz 1x105 šūnām/ml ar svaigu barotni un pārlejiet jaunās kolbās.
Sēšanas blīvums
Sāciet jaunas kultūras, izmantojot 2 līdz 3 x 106 šūnas/ml. Kad šūnas ir atguvušās no sasaldēšanas un atkausēšanas procesa pēc 1 līdz 2 pārnesumiem, sadalot šūnas, pielāgojiet šūnu blīvumu līdz 1 x 106 šūnas/ml.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc sasaldēšanas tika savākti aptuveni 53 % no sākotnējā šūnu skaita.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Šķirne / pasuga
BALB/c
Donora vecums
Pieaugušo