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Meth A sarcoma
Tessuto
La pelle
Malattia
Fibrosarcoma
Sinonimi
Meth A, Meth-A, Meth-A-sarkom

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Meth A sarcoma

Cell line · Codice prodotto 400284

Meth A sarcoma cells, originating from a chemically induced tumor in Balb/c mice, provide a crucial model for understanding tumor biology and the molecula...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule di sarcoma Meth A, originate da un tumore indotto chimicamente in topi Balb/c, rappresentano un modello cruciale per la comprensione della biologia tumorale e dei meccanismi molecolari che guidano lo sviluppo del sarcoma. Un aspetto fondamentale della ricerca sulle cellule di sarcoma Meth A riguarda lo studio della proteina p53, nota per il suo ruolo nella soppressione dei tumori. In genere, la p53 è altamente labile, ma la sua stabilità è notevolmente aumentata in molte linee cellulari di fibrosarcoma derivate da tumori indotti da agenti fisici o chimici. Questa stabilizzazione è spesso correlata alla formazione di un complesso stabile con la proteina da shock termico cognata hsc70.

È interessante notare che le cellule di sarcoma Meth A presentano un comportamento unico per quanto riguarda la stabilità di p53. Nonostante la p53 sia molto stabile in queste cellule, non vi è alcuna interazione rilevabile con hsc70. Ciò suggerisce che l'incapacità di formare tale complesso è probabilmente dovuta alla struttura primaria della p53 endogena. Quando altre varianti di p53 vengono introdotte in cellule di sarcoma Meth A, si forma un complesso p53-hsc70, indicando che la struttura primaria di p53 è un determinante critico della sua interazione con hsc70 e, di conseguenza, della sua stabilità.

Ulteriori indagini con esperimenti di trasfezione stabile hanno rivelato che le diverse varianti di p53 sono degradate a tassi diversi in vari tipi di cellule trasformate, sottolineando il ruolo della struttura primaria di p53 nel determinare il suo tasso di turnover. Inoltre, anche l'ambiente cellulare influenza la stabilità di p53, come evidenziato dai diversi tassi di degradazione di almeno una variante di p53 in cellule BALB/c-3T3 non trasformate rispetto a cellule di fibrosarcoma trasformate. Ciò evidenzia la complessa interazione tra fattori genetici e contesto cellulare nella regolazione della stabilità e della funzione di p53 nelle cellule di sarcoma Meth A.

Tessuto
La pelle
Malattia
Fibrosarcoma
Sinonimi
  • Meth A
  • Meth-A
  • Meth-A-sarkom

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Sospensione
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Celle rotonde
Tumorigenico
Sì
Tempo di raddoppio
da 28 a 30 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Sarcoma Meth A (numero di catalogo Cytion 400284)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5798

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Subcoltura
Lasciare che gli aggregati cellulari si depositino sul fondo della beuta, eliminare il mezzo surnatante, disperdere le cellule con un delicato pipettaggio e trasferirle in nuove beute. Risospendere la sospensione cellulare nella beuta e prelevare un'aliquota rappresentativa per contare il numero di cellule per ml. Diluire la sospensione cellulare a 1x105 cellule/ml con mezzo fresco e trasferirla in nuove beute.
Densità di semina
Avviare nuove colture utilizzando 2-3 x 106 cellule/ml. Una volta che le cellule si sono riprese dal processo di congelamento e scongelamento dopo 1-2 passaggi, regolare la densità cellulare a 1 x 106 cellule/ml durante la divisione delle cellule.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo il congelamento è stato raccolto circa il 53% del numero iniziale di cellule.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Razza / sottospecie
BALB/c
Età dei donatori
Adulti