Skip to content
Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH
Tissue
כליה
Disease
כליה עוברית שעברה שינוי/הונצחה (רקע HEK293; טרנסגן Rpn11-HTBH)

Documents

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Cell line · Product number 305719

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH is a stably transfected derivative of the HEK293 (Human Embryonic Kidney 293) cell line, engineered to express a tagged ver...

US$800.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

תאי HEK293 יציבים - Rpn11-HTBH הם נגזרת שעברה טרנספקציה יציבה של קו התאים HEK293 (Human Embryonic Kidney 293), שהונדסו לביטוי גרסה מתויגת של Rpn11 (הידוע גם כ-PSMD14 או POH1), יחידת המשנה של הדוביקוויטינאז במכלול מכסה הפרוטאזום 26S. Rpn11 הוא דה-אוביקוויטינאז בעל תחום JAMM התלוי ב-Zn²⁺, המסיר שרשראות אוביקוויטין מסובסטרטים הקשורים לפרוטאזום במהלך פירוק פרוטאזומי. התג HTBH (הקס-היסטידין-TEV-פפטיד מקבל ביוטין-הקס-היסטידין) מאפשר טיהור על בסיס זיקה של קומפלקסים המכילים Rpn11 בתנאים טבעיים, מה שהופך את קו התאים הזה למתאים במיוחד לטיהור קומפלקסי פרוטאזום ולמחקרי אינטראקטום.

קו תאים זה מתאים למחקרים על ביולוגיית הפרוטאזום 26S, ויסות מסלול האוביקוויטין-פרוטאזום (UPS), תפקוד Rpn11/PSMD14 בבקרת איכות החלבונים, הרכבת הפרוטאזום ודינמיקתו, ומנגנון הפעולה של מעכבי הפרוטאזום. היא משמשת גם לטיהור זיקה של קומפלקסי פרוטאזום טבעיים וכמודל לחקר הביולוגיה של דה-אוביקוויטינאז בהקשר של הפרוטאזום. מערכת התיוג HTBH מאפשרת טיהור קפדני ביותר של קומפלקסים ביוטיניליים באמצעות שיטת "פול-דאון" (pulldowns) המבוססת על סטרפטאווידין.

Tissue
כליה
Disease
כליה עוברית שעברה שינוי/הונצחה (רקע HEK293; טרנסגן Rpn11-HTBH)
Applications
ביולוגיה של הפרוטאזום 26S; תפקוד Rpn11/PSMD14; מסלול האוביקוויטין-פרוטאזום; טיהור קומפלקס הפרוטאזום; ביולוגיה של דה-אוביקוויטינאז; טיהור על בסיס זיקה באמצעות תווית HTBH; מחקרים על האינטראקטום של הפרוטאזום

02Classification

Organism
Human
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HEK293 derivative contains a stably integrated Rpn11-HTBH expression cassette (hexahistidine-TEV-biotin acceptor peptide-hexahistidine tagged Rpn11/PSMD14). This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
דמוי אפיתל
Cell type
תאי אפיתל
Doubling time
כ-24 עד 36 שעות

04Identifiers

Citation
תאי HEK293 יציבים - Rpn11-HTBH (מספר קטלוג Cytion 305719)
NCBI TaxID
9606

05Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
רוב התאים מתנתקים ב-PBS; במידת הצורך, יש להוסיף Accutase למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר
Subculturing
יש להסיר את התרבית מהמדיום, לשטוף אותה ב-PBS ללא סידן ומגנזיום, לכסות ב-Accutase, להניח באינקובטור למשך 8–10 דקות בטמפרטורת החדר, להחזיר את התאים לתמיסה במדיום, לסובב בצנטריפוגה ב-300×g למשך 3 דקות, לשפוך את הנוזל העליון, ולשתול מחדש במדיום טרי.
Split ratio
1 עד 10
Seeding density
2 עד 4 × 10⁴ תאים/סמ"ר
Fluid renewal
כל 2-3 ימים
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Quality control and cryopreservation

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.