Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Stabile HEK293-celler – Rpn11-HTBH er et stabilt transfisert derivat av HEK293 (Human Embryonic Kidney 293)-cellelinjen, utviklet for å uttrykke en merket versjon av Rpn11 (også kjent som PSMD14 eller POH1), deubiquitinase-underenheten i 26S-proteasomets lokkkompleks. Rpn11 er et Zn²⁺-avhengig deubiquitinase med JAMM-domene som fjerner ubiquitin-kjeder fra proteasombundne substrater under proteasomal nedbrytning. HTBH-merket (heksahistidin-TEV-biotin-akseptorpeptid-heksahistidin) muliggjør affinitetspurifisering av Rpn11-holdige komplekser under naturlige betingelser, noe som gjør denne cellelinjen spesielt egnet for rensing av proteasomkomplekser og interaktomstudier.

Denne cellelinjen kan brukes i studier av 26S-proteasombiologi, regulering av ubiquitin-proteasom-veien (UPS), Rpn11/PSMD14-funksjonen i proteinkvalitetskontroll, proteasom-sammenstilling og -dynamikk, samt virkningsmekanismen til proteasominhibitorer. Den brukes også til affinitetspurifisering av native proteasomkomplekser og som modell for å studere deubiquitinase-biologi i sammenheng med proteasomet. HTBH-merkingssystemet muliggjør svært streng rensing av biotinylert komplekser ved hjelp av streptavidin-baserte pulldowns.

37 °C, 5 %_CO2, befuktet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

Hos Cytion står vi bak kvaliteten og levedyktigheten til produktene våre. Vi garanterer at cellene våre vil være levedyktige ved starten av dyrkingen i 60 dager etter at de er sendt fra våre anlegg. Vi forsikrer at alle materialer er i samsvar med spesifikasjonene som er beskrevet i analysesertifikatet og/eller produktarket

For fullstendig informasjon, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring