İçeriğe atla
Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH
Doku
Böbrek
Hastalık
Dönüştürülmüş/ölümsüzleştirilmiş fetal böbrek (HEK293 arka planı; Rpn11-HTBH transgeni)

Belgeler

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Cell line · Ürün numarası 305719

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH is a stably transfected derivative of the HEK293 (Human Embryonic Kidney 293) cell line, engineered to express a tagged ver...

€800.00vergi ve kargo hariç

Kişiselleştirme / Öneriler

Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
  • CoA
1

01Genel bilgiler

Açıklama

Kararlı HEK293 Hücreleri-Rpn11-HTBH, HEK293 (İnsan Embriyonik Böbrek 293) hücre hattının kararlı bir şekilde transfekte edilmiş bir türevidir ve 26S proteazom kapağı kompleksinin deubiquitinaz alt birimi olan Rpn11'in (PSMD14 veya POH1 olarak da bilinir) etiketli bir versiyonunu eksprese etmek üzere tasarlanmıştır. Rpn11, proteazomal yıkım sırasında proteazoma bağlı substratlardan ubikuitin zincirlerini uzaklaştıran, Zn²⁺'ya bağımlı bir JAMM-alanlı deubikuitinazdır. HTBH etiketi (heksahistidin-TEV-biotin alıcı peptid-heksahistidin), doğal koşullar altında Rpn11 içeren komplekslerin afinite saflaştırılmasını mümkün kılar; bu da bu hücre hattını proteazom kompleksi saflaştırma ve etkileşim ağı çalışmaları için özellikle uygun hale getirir.

Bu hücre hattı, 26S proteazom biyolojisi, ubikuitin-proteazom yolu (UPS) regülasyonu, protein kalite kontrolünde Rpn11/PSMD14 işlevi, proteazom montajı ve dinamiği ile proteazom inhibitörlerinin etki mekanizması üzerine yapılan çalışmalarda kullanılabilir. Ayrıca, doğal proteazom komplekslerinin afinite saflaştırmasında ve proteazom bağlamında deubikuitinaz biyolojisini incelemek için bir model olarak da kullanılır. HTBH etiketleme sistemi, streptavidin bazlı pulldown yöntemleri kullanılarak biyotinile edilmiş komplekslerin son derece titiz bir şekilde saflaştırılmasını sağlar.

Doku
Böbrek
Hastalık
Dönüştürülmüş/ölümsüzleştirilmiş fetal böbrek (HEK293 arka planı; Rpn11-HTBH transgeni)
Uygulamalar
26S proteazom biyolojisi; Rpn11/PSMD14 işlevi; ubikuitin-proteazom yolu; proteazom kompleksinin saflaştırılması; deubikuitinaz biyolojisi; HTBH-etiketli afinite saflaştırması; proteazom etkileşim ağı çalışmaları

02Sınıflandırma

Canlı
İnsan
Büyüme özellikleri
Bağlı
GDO durumu
GMO-S1
GDO durumuna ilişkin ayrıntılar
GMO-S1: This HEK293 derivative contains a stably integrated Rpn11-HTBH expression cassette (hexahistidine-TEV-biotin acceptor peptide-hexahistidine tagged Rpn11/PSMD14). This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Epitel benzeri
Hücre türü
Epitel hücreleri
İki katına çıkma süresi
yaklaşık 24 ila 36 saat

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
Kararlı HEK293 Hücreleri-Rpn11-HTBH (Cytion katalog numarası 305719)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
9606

05İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
DMEM, w: 4,5 g/L Glukoz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Sodyum piruvat (Cytion ürün numarası 820300a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Çoğu hücre PBS içinde ayrılır; gerekirse Accutase ekleyin ve 5 dakika oda sıcaklığında bekletin
Alt kültür oluşturma
Besiyerini çıkarın, kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın, Accutase ile kaplayın, oda sıcaklığında 8–10 dakika inkübe edin, besiyerinde yeniden süspansiyon haline getirin, 300×g’de 3 dakika santrifüjleyin, süpernatantı atın, taze besiyerine yeniden ekleyin.
Bölünme oranı
1'den 10'a kadar
Ekim yoğunluğu
2 ila 4 × 10⁴ hücre/cm²
Sıvı değişimi
Her 2 ila 3 günde bir
Çözme ve kültürleme

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı + %10 DMSO kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.