Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH
Cell line · Product number 305719
Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH is a stably transfected derivative of the HEK293 (Human Embryonic Kidney 293) cell line, engineered to express a tagged ver...
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01General information
- Description
稳定HEK293-Rpn11-HTBH细胞是HEK293 (人胚胎肾293)细胞系的稳定转染衍生物,经工程改造可表达带标签的Rpn11(又称PSMD14或POH1),该蛋白是26S蛋白酶体盖子复合体的去泛素化酶亚基。 Rpn11是一种Zn²⁺依赖性的JAMM结构域去泛素化酶,可在蛋白酶体降解过程中从与蛋白酶体结合的底物上去除泛素链。 HTBH标签(六组氨酸-TEV-生物素受体肽-六组氨酸)可在天然条件下实现含Rpn11复合物的亲和纯化,因此该细胞系特别适用于蛋白酶体复合物的纯化及相互作用组研究。
该细胞系适用于 26S 蛋白酶体生物学、泛素-蛋白酶体通路(UPS)调控、Rpn11/PSMD14 在蛋白质质量控制中的功能、蛋白酶体组装与动力学以及蛋白酶体抑制剂作用机制的研究。 它还用于天然蛋白酶体复合物的亲和纯化,并作为研究蛋白酶体背景下去泛素酶生物学的模型。HTBH 标签系统可通过基于链霉亲和素的拉下法,对生物素标记的复合物进行高度严格的纯化。
- Tissue
- 肾脏
- Disease
- 转基因/永生化胎儿肾脏(HEK293背景;Rpn11-HTBH转基因)
- Applications
- 26S蛋白酶体的生物学;Rpn11/PSMD14的功能;泛素-蛋白酶体通路;蛋白酶体复合物的纯化;去泛素酶的生物学;HTBH标签亲和纯化;蛋白酶体相互作用组研究
02Classification
- Organism
- Human
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This HEK293 derivative contains a stably integrated Rpn11-HTBH expression cassette (hexahistidine-TEV-biotin acceptor peptide-hexahistidine tagged Rpn11/PSMD14). This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- 上皮样
- Cell type
- 上皮细胞
- Doubling time
- 约24至36小时
04Identifiers
- Citation
- 稳定HEK293细胞-Rpn11-HTBH(Cytion产品编号 305719)
- NCBI TaxID
- 9606
05Handling and culture
- Culture medium
- DMEM,w:4.5 克/升葡萄糖,w:4 毫摩尔 L-谷氨酰胺,w:3.7 克/升 NaHCO3,w:1.0 毫摩尔丙酮酸钠(Cytion 编号 820300a)。
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, 加湿环境。
- Supplements
- 在培养基中添加 10% FBS
- Dissociation reagent
- 大多数细胞在PBS中即可脱落,如有必要,可在室温下加入Accutase处理5分钟
- Subculturing
- 移除培养基,用不含钙和镁的PBS洗涤,加入Accutase覆盖细胞,在室温下孵育8–10分钟,用培养基重悬细胞,以300×g离心3分钟,弃去上清液,将细胞接种到新鲜培养基中。
- Split ratio
- 1 到 10
- Seeding density
- 2 至 4 × 10⁴ 个细胞/cm²
- Fluid renewal
- 每 2 至 3 天
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.
Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery
06Quality control and cryopreservation
- Freeze medium
- 作为冷冻保存培养基,我们使用完全生长培养基+10% DMSO,以获得足够的解冻后存活率。
- Storage conditions
如需长期保存,可将样品瓶放入气相液氮中,温度约为 -150 至 -196 ℃。在-80 °C下保存只能作为转入液氮前的短暂过渡。
- Shipping conditions
冷冻保存的细胞系用干冰装运,并用经过验证的隔热包装和足够的制冷剂在整个运输过程中保持约 -78 °C 的温度。收到货后,应立即检查容器,并立即将小瓶转移到适当的储藏室。
07Legal and safety
- Safety precautions
- 计划将低温样品储存在液氮中以便将来解冻时,必须遵守严格的安全措施。在将冷冻样本移入或移出液氮罐时,必须穿戴适当的防护手套和防护服,并使用面罩或安全护目镜。这样做是为了降低在移出时因冷冻样品爆炸而造成伤害的风险,因为爆炸可能导致锋利的碎片飞溅。
- Warranty
在Cytion,我们保证产品的质量和活力。 我们保证,从我们的工厂发货后 60 天内,我们的细胞在开始培养时都是存活的。 我们保证所有材料均符合分析证书和/或产品说明书中描述的规格。
有关详细信息,请参阅我们的 <a href="" /Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">保修声明 。
- Material Transfer Agreement required
- Yes
