Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Stabilní buňky HEK293-Rpn11-HTBH představují stabilně transfekovanou odvozeninu buněčné linie HEK293 (Human Embryonic Kidney 293), geneticky upravené tak, aby exprimovaly značenou verzi Rpn11 (známého také jako PSMD14 nebo POH1), podjednotky deubiquitinázy komplexu víčka 26S proteasomu. Rpn11 je Zn²⁺-dependentní deubiquitináza s doménou JAMM, která odstraňuje ubikvitinové řetězce ze substrátů vázaných na proteasom během proteasomální degradace. Značka HTBH (hexahistidin-TEV-biotinový akceptorový peptid-hexahistidin) umožňuje afinitní purifikaci komplexů obsahujících Rpn11 za nativních podmínek, díky čemuž je tato buněčná linie obzvláště vhodná pro purifikaci proteasomových komplexů a studium interakomů.

Tato buněčná linie je použitelná ve studiích biologie 26S proteasomu, regulace ubikvitin-proteasomové dráhy (UPS), funkce Rpn11/PSMD14 při kontrole kvality proteinů, sestavování a dynamiky proteasomu a mechanismu účinku inhibitorů proteasomu. Používá se také k afinitní purifikaci nativních proteasomových komplexů a jako model pro studium biologie deubiquitináz v kontextu proteasomu. Systém značení HTBH umožňuje vysoce selektivní purifikaci biotinylovaných komplexů pomocí pulldownů na bázi streptavidinu.

37 °C, 5 %_CO2, zvlhčená atmosféra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

Ve společnosti Cytion si stojíme za kvalitou a životaschopností našich produktů. Zaručujeme, že naše buňky budou životaschopné na začátku kultivace po dobu 60 dnů po odeslání z našich zařízení. Zaručujeme, že všechny materiály odpovídají specifikacím popsaným v certifikátu analýzy a/nebo v produktovém listu

Úplné informace naleznete v našem <a href=""/Kdo-jsme/Záruka/"" hreflang=""x-default"">Záručním prohlášení