الانتقال إلى المحتوى
Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH
الأنسجة
الكلى
المرض
كلية جنينية مُعدَّلة وراثيًّا/مُخلَّدة (خلفية HEK293؛ جين مُدخل Rpn11-HTBH)

المستندات

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Cell line · رقم المنتج 305719

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH is a stably transfected derivative of the HEK293 (Human Embryonic Kidney 293) cell line, engineered to express a tagged ver...

€800.00باستثناء الضريبة وتكاليف الشحن

التخصيص / التوصيات

متوفر
لوت
موصى بها (أحدث دفعة)
  • CoA
1

01معلومات عامة

الوصف

تُعد خلايا HEK293 المستقرة-Rpn11-HTBH مشتقًا مُعدَّلًا وراثيًّا بشكل مستقر من سلالة الخلايا HEK293 (الكلى الجنينية البشرية 293)، وقد تم هندستها لتعبّر عن نسخة مُعلَّمة من Rpn11 (المعروف أيضًا باسم PSMD14 أو POH1)، وهي الوحدة الفرعية لإنزيم إزالة الأوبيكويتين في مجمع غطاء البروتيازوم 26S. Rpn11 هو إنزيم إزالة اليوبيكويتين المعتمد على Zn²⁺ ذو نطاق JAMM، والذي يزيل سلاسل اليوبيكويتين من الركائز المرتبطة بالبروتيازوم أثناء عملية التحلل البروتيازومي. تتيح علامة HTBH (هيكساهيستيدين-TEV-ببتيد مستقبل البيوتين-هيكساهيستيدين) تنقية المجمعات المحتوية على Rpn11 عن طريق الترابط في الظروف الطبيعية، مما يجعل هذا الخط مناسبًا بشكل خاص لتنقية مجمعات البروتيازوم ودراسات التفاعلات.

يمكن استخدام هذا الخط الخلوي في دراسات بيولوجيا البروتيازوم 26S، وتنظيم مسار اليوبيكويتين-البروتيازوم (UPS)، ووظيفة Rpn11/PSMD14 في مراقبة جودة البروتينات، وتجميع البروتيازوم وديناميكياته، وآلية عمل مثبطات البروتيازوم. كما يُستخدم لتنقية مجمعات البروتيازوم الطبيعية عن طريق الارتباط، وكنموذج لدراسة بيولوجيا إنزيمات إزالة اليوبيكويتين في سياق البروتيازوم. يتيح نظام الوسم HTBH تنقية شديدة الدقة للمجمعات المُبيوتينية باستخدام عمليات السحب القائمة على الستربتافيدين.

الأنسجة
الكلى
المرض
كلية جنينية مُعدَّلة وراثيًّا/مُخلَّدة (خلفية HEK293؛ جين مُدخل Rpn11-HTBH)
التطبيقات
بيولوجيا البروتيازوم 26S؛ وظيفة Rpn11/PSMD14؛ مسار اليوبيكويتين-البروتيازوم؛ تنقية مركب البروتيازوم؛ بيولوجيا إنزيمات إزالة اليوبيكويتين؛ التنقية بالتقارب باستخدام علامة HTBH؛ دراسات تفاعلات البروتيازوم

02التصنيف

كائن حي
إنسان
خصائص النمو
الملتزم
حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1
تفاصيل حالة الكائنات المعدلة وراثيًا
GMO-S1: This HEK293 derivative contains a stably integrated Rpn11-HTBH expression cassette (hexahistidine-TEV-biotin acceptor peptide-hexahistidine tagged Rpn11/PSMD14). This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
مستوى السلامة البيولوجية
1

03الخصائص

المورفولوجيا
شبيه بالظهارة
نوع الخلية
الخلايا الظهارية
زمن المضاعفة
حوالي 24 إلى 36 ساعة

04المعرّفات

المرجع
خلايا HEK293 المستقرة - Rpn11-HTBH (رقم الكتالوج لدى Cytion: 305719)
رقم التعريف الضريبي لدى NCBI
9606

05التعامل مع النباتات وزراعتها

وسط الاستزراع
DMEM، ث: 4.5 جم/لتر جلوكوز، ث: 4 مليمتر جلوتامين، ث: 3.7 جم/لتر NaHCO3، ث: 1.0 مليمتر بيروفات الصوديوم (رقم المادة 820300a من سايتيون)
بيئة الحضانة

37 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

المكملات الغذائية
قم بتزويد الوسط ب 10٪ من ال FBS
كاشف التفكك
تنفصل معظم الخلايا في محلول PBS؛ وإذا لزم الأمر، أضف Accutase لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة
إعادة الاستنبات
أزل الوسط، واغسله بمحلول PBS خالٍ من الكالسيوم والمغنيسيوم، ثم غطّه بمحلول Accutase، واحتفظ به في الحاضنة لمدة 8–10 دقائق في درجة حرارة الغرفة، وأعد تعليقه في الوسط، ثم قم بالطرد المركزي بسرعة 300×g لمدة 3 دقائق، وتخلص من السائل الفوقي، وأعد زرعه في وسط جديد.
نسبة التقسيم
من 1 إلى 10
كثافة البذر
من 2 إلى 4 × 10⁴ خلية/سم²
تجديد السوائل
كل يومين إلى 3 أيام
إذابة الثلج والزراعة

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06مراقبة الجودة والحفظ بالتبريد

وسط التجميد
كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل + 10% DMSO للحصول على صلاحية كافية بعد ذوبان الجليد.
شروط التخزين

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

شروط الشحن

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.