Siirry sisältöön
Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH
Kudos
Munuaiset
Sairaus
Muunnettu/ikuistettu sikiön munuainen (HEK293-tausta; Rpn11-HTBH-transgeeni)

Asiakirjat

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Cell line · Tuotenumero 305719

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH is a stably transfected derivative of the HEK293 (Human Embryonic Kidney 293) cell line, engineered to express a tagged ver...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja

Räätälöinti / Suositukset

Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH on HEK293 (Human Embryonic Kidney 293) -solulinjasta, joka on muokattu ilmentämään merkittyä versiota Rpn11:stä (tunnetaan myös nimillä PSMD14 tai POH1), joka on 26S-proteasomin kansikompleksin deubikitiinaasi-alayksikkö. Rpn11 on Zn²⁺-riippuvainen JAMM-domeeninen deubikitiinaasi, joka poistaa ubikitiiniketjut proteasomiin sitoutuneista substraateista proteasomaalisen hajoamisen aikana. HTBH-tunniste (heksahistidiini-TEV-biotiini-akseptoripeptidi-heksahistidiini) mahdollistaa Rpn11:tä sisältävien kompleksien affiniteettipuhdistuksen natiiviolosuhteissa, minkä ansiosta tämä solulinja sopii erityisen hyvin proteasomikompleksien puhdistukseen ja interaktomitutkimuksiin.

Tätä solulinjaa voidaan käyttää 26S-proteasomin biologian, ubikitiini-proteasomireitin (UPS) säätelyn, Rpn11/PSMD14:n toiminnan proteiinien laadunvalvonnassa, proteasomin kokoonpanon ja dynamiikan sekä proteasomin estäjien vaikutusmekanismien tutkimuksissa. Sitä käytetään myös natiivien proteasomikompleksien affiniteettipuhdistukseen sekä mallina deubikitiinaasibiologian tutkimiseen proteasomin kontekstissa. HTBH-merkintäjärjestelmä mahdollistaa biotinyloitujen kompleksien erittäin tiukan puhdistuksen streptavidiinipohjaisten pulldown-menetelmien avulla.

Kudos
Munuaiset
Sairaus
Muunnettu/ikuistettu sikiön munuainen (HEK293-tausta; Rpn11-HTBH-transgeeni)
Sovellukset
26S-proteasomin biologia; Rpn11/PSMD14:n toiminta; ubikitiini-proteasomireitti; proteasomikompleksin puhdistus; deubikitiinaasien biologia; HTBH-tag-affiniteettipuhdistus; proteasomin vuorovaikutusverkoston tutkimukset

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
GMO-status
GMO-S1
GMO-statuksen tiedot
GMO-S1: This HEK293 derivative contains a stably integrated Rpn11-HTBH expression cassette (hexahistidine-TEV-biotin acceptor peptide-hexahistidine tagged Rpn11/PSMD14). This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Solutyyppi
Epiteelisolut
Kaksinkertaistumisaika
noin 24–36 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
Vakaat HEK293-solut – Rpn11-HTBH (Cytion-tuotenumero 305719)
NCBI-verotunnus
9606

05Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 %:lla FBS:llä
Dissosiaatioreagenssi
Suurin osa soluista irtoaa PBS-liuoksessa; lisää tarvittaessa Accutasea ja anna vaikuttaa 5 minuuttia huoneenlämmössä
Soluviljely
Poista elatusaine, pese PBS-liuoksella, josta on poistettu kalsium ja magnesium, lisää Accutasea, inkuboi 8–10 minuuttia huoneenlämmössä, suspendoi uudelleen elatusaineeseen, sentrifugoi 300×g:ssa 3 minuuttia, heitä supernatantti pois ja siirrä solut uuteen elatusaineeseen.
Jakosuhde
1–10
Kylvötiheys
2–4 × 10⁴ solua/cm²
Nesteen uusiminen
2-3 päivän välein
Sulatus ja viljely

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa + 10 % DMSO:ta, jotta elinkelpoisuus olisi riittävä sulatuksen jälkeen.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.