Перейти до вмісту
Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH
Тканина
Нирка
Хвороба
Трансформована/увічнена нирка плода (на основі клітинної лінії HEK293; трансген Rpn11-HTBH)

Документи

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Cell line · Номер товару 305719

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH is a stably transfected derivative of the HEK293 (Human Embryonic Kidney 293) cell line, engineered to express a tagged ver...

€800.00без урахування податків та вартості доставки

Налаштування / Рекомендації

Є в наявності
Лот
Рекомендовано (найсвіжіша партія)
  • CoA
1

01Загальна інформація

Опис

Стабільні клітини HEK293-Rpn11-HTBH — це стабільно трансфікований варіант клітинної лінії HEK293 (Human Embryonic Kidney 293), модифікована для експресії міченої версії Rpn11 (також відомого як PSMD14 або POH1) — субодиниці деубіквітинази комплексу кришки 26S-протеасоми. Rpn11 — це Zn²⁺-залежна деубіквітиназа з доменом JAMM, яка видаляє ланцюги убіквітину з субстратів, зв’язаних із протеасомою, під час протеасомального розщеплення. Мітка HTBH (гексагістидин-TEV-пептид-акцептор біотину-гексагістидин) дозволяє проводити афінне очищення комплексів, що містять Rpn11, у нативних умовах, завдяки чому ця клітинна лінія особливо підходить для очищення протеасомних комплексів та досліджень інтерактома.

Цю клітинну лінію можна застосовувати у дослідженнях біології 26S-протеасоми, регуляції убіквітин-протеасомального шляху (UPS), функції Rpn11/PSMD14 у контролі якості білків, збірки та динаміки протеасоми, а також механізму дії інгібіторів протеасоми. Її також використовують для афінного очищення нативних протеасомних комплексів та як модель для вивчення біології деубіквітиназ у контексті протеасоми. Система мічення HTBH дозволяє здійснювати високочутливе очищення біотінільованих комплексів за допомогою методу пулдауну на основі стрептавідину.

Тканина
Нирка
Хвороба
Трансформована/увічнена нирка плода (на основі клітинної лінії HEK293; трансген Rpn11-HTBH)
Застосування
Біологія 26S-протеасоми; функція Rpn11/PSMD14; убіквітин-протеасомальний шлях; очищення протеасомального комплексу; біологія деубіквітиназ; афінне очищення за допомогою HTBH-тегу; дослідження інтерактома протеасоми

02Класифікація

Організм
Людина
Характеристики росту
Прихильник
Статус ГМО
GMO-S1
Детальна інформація щодо статусу ГМО
GMO-S1: This HEK293 derivative contains a stably integrated Rpn11-HTBH expression cassette (hexahistidine-TEV-biotin acceptor peptide-hexahistidine tagged Rpn11/PSMD14). This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Рівень біобезпеки
1

03Характеристики

Морфологія
Епітеліальноподібні
Тип клітини
Епітеліальні клітини
Час подвоєння
приблизно від 24 до 36 годин

04Ідентифікатори

Посилання
Стабільні клітини HEK293 — Rpn11-HTBH (номер у каталозі Cytion 305719)
Ідентифікаційний номер платника податків NCBI
9606

05Обробка та вирощування

Живильне середовище
ДМЕМ, w: 4,5 г/л Глюкоза, w: 4 мМ L-глутамін, w: 3,7 г/л NaHCO3, w: 1,0 мМ піруват натрію (цит. номер 820300a)
Атмосфера інкубації

37°C, 5% CO2, волога атмосфера.

Добавки
Додайте до середовища 10% FBS
Реагент для дисоціації
Більшість клітин відокремлюються в PBS; за необхідності додайте Accutase на 5 хвилин при кімнатній температурі
Пересадка в нове середовище
Видалити середовище, промити PBS без кальцію та магнію, залити Accutase, інкубувати 8–10 хв при кімнатній температурі, ресуспендувати в середовищі, центрифугувати при 300×g протягом 3 хв, злити супернатант, пересіяти в свіже середовище.
Коефіцієнт розподілу
від 1 до 10
Щільність висіву
від 2 до 4 × 10⁴ клітин/см²
Оновлення рідини
Кожні 2-3 дні
Розморожування та культивування

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Контроль якості та кріоконсервація

Середовище для заморожування
В якості середовища для кріоконсервування ми використовуємо повне живильне середовище + 10% ДМСО для адекватної життєздатності після розморожування.
Умови зберігання

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Умови доставки

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.