Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

As células HEK293 estáveis-Rpn11-HTBH são um derivado transfectado de forma estável da linhagem celular HEK293 (Rim Embrionário Humano 293), projetadas para expressar uma versão marcada da Rpn11 (também conhecida como PSMD14 ou POH1), a subunidade deubiquitinase do complexo da tampa do proteassoma 26S. A Rpn11 é uma desubiquitinase dependente de Zn²⁺ com domínio JAMM que remove cadeias de ubiquitina de substratos ligados ao proteassoma durante a degradação proteassômica. A marcação HTBH (hexahistidina-TEV-peptídeo aceitador de biotina-hexahistidina) permite a purificação por afinidade de complexos contendo Rpn11 em condições nativas, tornando essa linha particularmente adequada para a purificação de complexos do proteassoma e estudos de interatoma.

Essa linhagem celular é aplicável em estudos da biologia do proteassoma 26S, da regulação da via ubiquitina-proteassoma (UPS), da função de Rpn11/PSMD14 no controle de qualidade das proteínas, da montagem e dinâmica do proteassoma e do mecanismo de ação dos inibidores do proteassoma. Ela também é utilizada para a purificação por afinidade de complexos proteassômicos nativos e como modelo para o estudo da biologia das desubiquitinases no contexto do proteassoma. O sistema de marcação HTBH permite a purificação altamente rigorosa de complexos biotinilados por meio de pulldowns baseados em estreptavidina.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.