Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Stabilne komórki HEK293-Rpn11-HTBH to stabilnie transfekowana odmiana linii komórkowej HEK293 (Human Embryonic Kidney 293), zmodyfikowana genetycznie w celu ekspresji znakowanej wersji białka Rpn11 (znanego również jako PSMD14 lub POH1), podjednostki deubikwitynazy kompleksu pokrywy proteasomu 26S. Rpn11 jest zależną od Zn²⁺ deubikwitynazą z domeną JAMM, która usuwa łańcuchy ubikwityny z substratów związanych z proteasomem podczas degradacji proteasomalnej. Znacznik HTBH (heksahistydyna-TEV-peptyd akceptorowy biotyny-heksahistydyna) umożliwia oczyszczanie powinowactwowe kompleksów zawierających Rpn11 w warunkach natywnych, dzięki czemu linia ta nadaje się szczególnie do oczyszczania kompleksów proteasomowych oraz badań interakomicznych.

Linia komórkowa ta znajduje zastosowanie w badaniach nad biologią proteasomu 26S, regulacją szlaku ubikwityna-proteasom (UPS), funkcją Rpn11/PSMD14 w kontroli jakości białek, montażem i dynamiką proteasomu oraz mechanizmem działania inhibitorów proteasomu. Wykorzystuje się ją również do oczyszczania powinowactwowego natywnych kompleksów proteasomowych oraz jako model do badań nad biologią deubikwitynaz w kontekście proteasomu. System znakowania HTBH umożliwia bardzo rygorystyczne oczyszczanie kompleksów biotynylowanych przy użyciu metod pulldown opartych na streptawidynie.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym