Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Las células HEK293 estables-Rpn11-HTBH son un derivado transfectado de manera estable de la línea celular HEK293 (riñón embrionario humano 293), diseñada para expresar una versión marcada de Rpn11 (también conocida como PSMD14 o POH1), la subunidad deubiquitinasa del complejo de la tapa del proteasoma 26S. Rpn11 es una desubiquitinasa dependiente de Zn²⁺ con dominio JAMM que elimina las cadenas de ubiquitina de los sustratos unidos al proteasoma durante la degradación proteasómica. La etiqueta HTBH (hexahistidina-TEV-péptido aceptor de biotina-hexahistidina) permite la purificación por afinidad de complejos que contienen Rpn11 en condiciones nativas, lo que hace que esta línea sea particularmente adecuada para la purificación de complejos del proteasoma y estudios de interactoma.

Esta línea celular es aplicable en estudios de la biología del proteasoma 26S, la regulación de la vía ubiquitina-proteasoma (UPS), la función de Rpn11/PSMD14 en el control de calidad de las proteínas, el ensamblaje y la dinámica del proteasoma, y el mecanismo de acción de los inhibidores del proteasoma. También se utiliza para la purificación por afinidad de complejos proteasómicos nativos y como modelo para estudiar la biología de las desubiquitinases en el contexto del proteasoma. El sistema de etiquetado HTBH permite una purificación altamente rigurosa de complejos biotinilados mediante pulldowns basados en estreptavidina.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.