Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Stabile HEK293-celler – Rpn11-HTBH er en stabilt transfekteret afart af HEK293 (Human Embryonic Kidney 293)-cellelinjen, der er konstrueret til at udtrykke en mærket version af Rpn11 (også kendt som PSMD14 eller POH1), deubiquitinase-underenheden i 26S-proteasomets lågkompleks. Rpn11 er et Zn²⁺-afhængigt deubiquitinase med et JAMM-domæne, der fjerner ubiquitin-kæder fra proteasombundne substrater under proteasomal nedbrydning. HTBH-mærket (hexahistidin-TEV-biotin-acceptorpeptid-hexahistidin) muliggør affinitetsoprensning af Rpn11-holdige komplekser under native betingelser, hvilket gør denne cellelinje særligt velegnet til oprensning af proteasomkomplekser og interaktomstudier.

Denne cellelinje kan anvendes i studier af 26S-proteasombiologi, regulering af ubiquitin-proteasom-vejen (UPS), Rpn11/PSMD14-funktionen i proteinkvalitetskontrol, proteasomsamling og -dynamik samt virkningsmekanismen for proteasominhibitorer. Den anvendes også til affinitetsoprensning af native proteasomkomplekser og som model til undersøgelse af deubiquitinase-biologi i sammenhæng med proteasomet. HTBH-mærkningssystemet muliggør en meget stringent oprensning af biotinylaterede komplekser ved hjælp af streptavidin-baserede pulldowns.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring