Langsung ke isi
Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH
Tisu
Ginjal
Penyakit
Ginjal janin yang telah dimodifikasi/diabadi (latar belakang sel HEK293; transgen Rpn11-HTBH)

Dokumen

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH

Cell line · Nomor produk 305719

Stable HEK293 Cells-Rpn11-HTBH is a stably transfected derivative of the HEK293 (Human Embryonic Kidney 293) cell line, engineered to express a tagged ver...

€800.00belum termasuk pajak dan ongkos kirim

Penyesuaian / Rekomendasi

Tersedia
Lot
Direkomendasikan (stok terbaru)
  • CoA
1

01Informasi umum

Deskripsi

Sel HEK293 Stabil-Rpn11-HTBH merupakan turunan sel HEK293 (Human Embryonic Kidney 293), yang direkayasa untuk mengekspresikan versi bertanda dari Rpn11 (juga dikenal sebagai PSMD14 atau POH1), subunit deubiquitinase dari kompleks tutup proteasom 26S. Rpn11 adalah deubiquitinase domain JAMM yang bergantung pada Zn²⁺ yang menghilangkan rantai ubiquitin dari substrat yang terikat proteasom selama degradasi proteasomal. Tag HTBH (hexahistidin-TEV-peptida penerima biotin-hexahistidin) memungkinkan pemurnian afinitas kompleks yang mengandung Rpn11 dalam kondisi alami, sehingga garis sel ini sangat cocok untuk pemurnian kompleks proteasom dan studi interaksi protein.

Lini sel ini dapat digunakan dalam studi biologi proteasom 26S, regulasi jalur ubiquitin-proteasom (UPS), fungsi Rpn11/PSMD14 dalam pengendalian kualitas protein, perakitan dan dinamika proteasom, serta mekanisme kerja penghambat proteasom. Lini sel ini juga digunakan untuk pemurnian afinitas kompleks proteasom dalam bentuk aslinya serta sebagai model untuk mempelajari biologi deubiquitinase dalam konteks proteasom. Sistem penandaan HTBH memungkinkan pemurnian yang sangat ketat terhadap kompleks yang dibiotinilasi menggunakan metode pulldown berbasis streptavidin.

Tisu
Ginjal
Penyakit
Ginjal janin yang telah dimodifikasi/diabadi (latar belakang sel HEK293; transgen Rpn11-HTBH)
Aplikasi
Biologi proteasom 26S; fungsi Rpn11/PSMD14; jalur ubiquitin-proteasom; pemurnian kompleks proteasom; biologi deubiquitinase; pemurnian afinitas dengan tag HTBH; studi interaktom proteasom

02Klasifikasi

Organisme
Manusia
Sifat-sifat pertumbuhan
Pengikut
Status GMO
GMO-S1
Rincian status GMO
GMO-S1: This HEK293 derivative contains a stably integrated Rpn11-HTBH expression cassette (hexahistidine-TEV-biotin acceptor peptide-hexahistidine tagged Rpn11/PSMD14). This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Tingkat keamanan hayati
1

03Karakteristik

Morfologi
Seperti epitel
Jenis sel
Sel epitel
Waktu penggandaan
sekitar 24 hingga 36 jam

04Pengidentifikasi

Referensi
Sel HEK293 yang Stabil-Rpn11-HTBH (nomor katalog Cytion 305719)
Nomor Identifikasi Pajak NCBI
9606

05Penanganan dan budidaya

Media kultur
DMEM, w: 4,5 g/L Glukosa, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natrium piruvat (Nomor artikel Cytion 820300a)
Suasana inkubasi

37°C, 5%CO2, atmosfer yang dilembabkan.

Suplemen
Tambahkan media dengan 10% FBS
Reagen disosiasi
Sebagian besar sel akan terlepas dalam larutan PBS; jika perlu, tambahkan Accutase selama 5 menit pada suhu kamar
Perbanyakan sel
Buang medium, cuci dengan PBS tanpa kalsium dan magnesium, tutupi dengan Accutase, inkubasi selama 8–10 menit pada suhu kamar, resuspensi dalam medium, sentrifugasi pada 300×g selama 3 menit, buang supernatan, tanam kembali dalam medium segar.
Rasio pemisahan
1 sampai 10
Kepadatan penanaman
2 hingga 4 × 10⁴ sel/cm²
Pergantian cairan
Setiap 2 hingga 3 hari
Pencairan dan pembiakan

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06Pengendalian mutu dan kriopreservasi

Media pembekuan
Sebagai media kriopreservasi, kami menggunakan media pertumbuhan lengkap + 10% DMSO untuk kelangsungan hidup pasca-pencairan yang memadai.
Kondisi penyimpanan

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Ketentuan pengiriman

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.