Úvod

Buňky NCI-H1781, známá také pod synonymy H1781, H-1781 a NCIH1781 (číslo přístupu v databázi Cellosaurus CVCL_1494), představují lidskou buněčnou linii nemalobuněčného karcinomu plic (NSCLC), která byla vytvořena v rámci systematického programu NCI pro buněčné linie karcinomu plic a poprvé zařazena do databáze buněčných linií Oddělení lékařské onkologie NCI-Navy. [1] Tato buněčná linie se stala základním modelem ve výzkumu NSCLC, protože nese aktivační inzerční mutaci v exonu 20 genu HER2 (G776insV_G/C, tj. delece glycin-776→valin/cystein, také označovanou jako A775insV,G776C), což je třída hnacích mutací vyskytující se přibližně u 2–3 % adenokarcinomů plic. Díky tomuto jedinečnému genetickému pozadí se linie NCI-H1781 stala nepostradatelnou pro hodnocení inhibitorů kinázy zaměřených na HER2, studium mechanismů rezistence a charakterizaci následných onkogenních signálních drah. Rozsáhlé genomické iniciativy, včetně Cancer Cell Line Encyclopedia (CCLE) a projektu Cancer Dependency Map, tuto linii dále doplnily o multiomické datové soubory, čímž rozšířily její využitelnost na farmakogenomické studie zahrnující všechny typy rakoviny. [2]

Hlavní body

• NCI-H1781 nese aktivující inzerční mutaci v exonu 20 genu HER2 (G776insV_G/C, také označovanou jako A775insV,G776C), která trvale aktivuje signální dráhy HER2 a EGFR.
• Tato buněčná linie představuje primární in vitro model pro testování nevratných a vratných inhibitorů kinázy HER2 u NSCLC.
• Vedle mutace HER2, která je hlavním faktorem onkogenního působení, se vyskytují homozygotní mutace v genu TP53 (p.Val157Phe) a heterozygotní mutace v genu PTEN způsobující posun čtecího rámce.
• Komplexní multiomická anotace (sekvenování celého exomu, RNA-seq, proteomika, SNP-čipy, screening léčiv) je veřejně dostupná v rámci rozsáhlých konsorciálních projektů.
• Tato buněčná linie je ze své podstaty rezistentní vůči inhibitorům tyrozinkinázy selektivním vůči EGFR, jako jsou gefitinib a erlotinib, což z ní činí cenný model rezistence.

Co je NCI-H1781?

Buněčná linie NCI-H1781 byla izolována z pleurálního výpotku u 66leté pacientky s diagnózou minimálně invazivního adenokarcinomu plic. Tato buněčná linie byla vytvořena v rámci interního programu NCI zaměřeného na buněčné linie plicního karcinomu, což je systematický projekt zahájený v roce 1976 s cílem vytvořit komplexně popsané modely lidských nádorových onemocnění. [3] Charakteristickým genetickým rysem je heterozygotní in-frame inzerce v exonu 20 genu HER2, která zavádí další aminokyseliny na pozici 776 kinázové domény, čímž vzniká konstitutivně aktivní receptor. Tato linie také nese homozygotní missense mutaci v genu TP53 (p.Val157Phe), kterou původně identifikovali Mitsudomi a spolupracovníci, [4] a heterozygotní posun čtecího rámce v genu PTEN (p.Gln245fs*6), který byl zjištěn v rámci rozsáhlých projektů sekvenování exomu. [2] [8] Analýza mikrosatelitní nestability zařazuje tuto linii do kategorie MSI-low a odhad původu ji řadí převážně do genetického pozadí severní a jižní Evropy. [5] Zásadní je, že samotný EGFR má v této buněčné linii divoký typ, takže citlivost na léčiva je dána výhradně mutovaným receptorem HER2, což poskytuje čistý model pro analýzu onkogenní signalizace specifické pro HER2.

Informace o buněčných kulturách

Výhody přípravku NCI-H1781

Hlavní výhodou linie NCI-H1781 je její geneticky definovaná inzerční mutace v exonu 20 genu HER2 na pozadí divokého typu EGFR. Tato kombinace umožňuje výzkumníkům jednoznačně přiřadit reakce na léčiva inhibici HER2, nikoli křížové aktivitě EGFR. Vzhledem k tomu, že tato třída mutací postihuje přibližně 2–3 % všech pacientů s adenokarcinomem plic a v minulosti pro ni neexistovaly schválené terapie, vyplňuje NCI-H1781 kritickou mezeru, kterou linie s mutacemi EGFR nemohou pokrýt. Tato linie proto zaujímá jedinečné postavení jako nejčastěji používaný buněčný referenční bod pro vývoj léčiv proti HER2-pozitivnímu NSCLC.

Multiomická charakterizace v rámci rozsáhlých konsorcií dále zvyšuje výzkumnou hodnotu této linie. Linie NCI-H1781 byla charakterizována pomocí sekvenování celého exomu, SNP-čipů, sekvenování RNA (RNA-seq), mikročipů, analýzy metylace DNA, proteinových čipů s reverzní fází a panelů pro screening léčiv. [2] [6] [7] [8] Díky této podrobnosti anotací mohou výzkumníci propojit své vlastní farmakologické poznatky se stávajícími multiomickými datovými soubory, což výrazně urychluje tvorbu hypotéz. Vysoká životaschopnost po rozmrazení (97,5 %) a stabilní životaschopnost při subkultivaci nad 97 % zajišťují reprodukovatelnost experimentálních výsledků napříč jednotlivými pasážemi.

NCI-H1781 se také dobře hodí jako interní negativní kontrola pro látky zaměřené na EGFR. Vzhledem k tomu, že EGFR je divokého typu a buněčná linie je ze své podstaty necitlivá na inhibitory tyrozinkinázy EGFR (TKI) první generace, umožňuje to přímé srovnání s liniemi s mutací EGFR, což zpřesňuje interpretaci mechanismů účinku. Jeho zařazení do celogenomového screeningu delecí genů polarity [9] a studie závislosti na efektorech genu KRAS [10] ukazuje šíři výzkumných kontextů, v nichž tato linie poskytuje užitečná data nad rámec své klasické role v souvislosti s HER2.

Omezení přípravku NCI-H1781

U linie NCI-H1781 se vyskytují souběžné mutace v genech TP53 a PTEN, které mohou zkreslit interpretaci údajů o reakci na léčivo. Homozygotní substituce TP53 p.Val157Phe může změnit p53-závislou apoptotickou signalizaci, čímž potenciálně ovlivní rozsah buněčné smrti pozorované po léčbě. Podobně může haploinsuficience PTEN aktivovat signální dráhu PI3K–AKT nezávisle na HER2, čímž vytváří pozadí konstitutivní signální dráhy přežití, které by mohlo účinky inhibitorů maskovat nebo zveličovat. Výzkumníci by proto měli zvážit provedení paralelních experimentů v izogenních systémech, pokud chtějí fenotypy specificky přiřadit k HER2.

Jelikož se jedná o dlouhodobě zavedenou buněčnou linii pocházející od jediného dárce, NCI-H1781 nezachycuje celou intratumorální heterogenitu přítomnou v nádorech pacientů. Klonální evoluce během opakovaných pasáží může vést k dalším genetickým změnám, které v původním nádoru nebyly přítomny. Ověřování pomocí profilování krátkých tandemových opakování a pravidelné testování na mykoplazmy zůstávají zásadními opatřeními kontroly kvality a rozsáhlé katalogy buněčných linií zdůraznily význam těchto postupů pro zachování důvěryhodnosti dat. [11]

Tato buněčná linie má rovněž omezenou přenositelnost do kontextů mimo adenokarcinom plic s inzercemi v exonu 20 genu HER2. Studie vyžadující mutace aktivující EGFR, řidičské alterace genu KRAS nebo jiné histologické podtypy NSCLC vyžadují doplňkové buněčné linie. Navíc jako dvourozměrný monovrstevný model nedokáže napodobit trojrozměrné mikroprostředí nádoru, vaskularizaci ani imunitní interakce přítomné in vivo, což podtrhuje nutnost následné validace pomocí xenotransplantátů nebo organoidů.

Ověřeno metodou STR, bez mykoplazmat, připraveno k odeslání. Zde si můžete prohlédnout úplné specifikace a provést objednávku

Aplikace

Hodnocení inhibitorů kinázy zaměřených na HER2

NCI-H1781 je referenční buněčná linie pro hodnocení inhibitorů kinázy zaměřených na HER2 u NSCLC. Průkopnická studie autorů Shimamura, Ji a Minami prokázala, že nevratný duální inhibitor EGFR/HER2 HKI-272 (neratinib) účinně inhiboval proliferaci buněk NCI-H1781 nesoucích mutaci G776insV_G/C, čímž vyvolal zastavení buněčného cyklu v fázi G1 a apoptotickou smrt. [12] Zásadní je, že tato práce rovněž ukázala, že HKI-272 potlačuje autofosforylaci jak HER2, tak EGFR, čímž stanovila mechanistický základ pro cílení na tuto třídu mutací pomocí nevratných inhibitorů. [12]

Na tomto základě následné studie potvrdily účinnost dalších nevratných pan-HER inhibitorů. MP-412 (AV-412), duální inhibitor EGFR/ErbB2, potlačil fosforylaci ERBB2 a následnou signalizaci v modelech xenotransplantátů NCI-H1781, čímž prokázal protinádorovou aktivitu in vivo v souladu s nálezy in vitro. [13] Pan-HER inhibitor tarloxotinib-E, proléčivo aktivované hypoxií, byl rovněž hodnocen proti buňkám NCI-H1781 spolu s buňkami Ba/F3 exprimujícími jednotlivé mutace HER2 a mechanismy rezistence vůči tomuto činidlu byly zkoumány pomocí mutagenetických screeningů s N-ethyl-N-nitrosourea. [14]

Studie hodnotící reverzibilní inhibitor HER2 sevabertinib uváděly silnou antiproliferační aktivitu v buňkách NCI-H1781 nesoucích inzerci A775insV,G776C v exonu 20 (_IC50 = 19,7 nmol/l), čímž se sevabertinib zařadil mezi nejúčinnější reverzibilní inhibitory testované v tomto modelu. Profil aktivity sevabertinibu v buňkách NCI-H1781 byl charakterizován společně s potlačením následných signálních drah, což zdůrazňuje užitečnost této buněčné linie pro přímá srovnání mezi třídami reverzibilních a ireverzibilních inhibitorů HER2. Protinádorový účinek neratinibu proti buňkám rakoviny plic nesoucím alterace onkogenu HER2 byl podobně charakterizován s využitím linie NCI-H1781 souběžně s kontrolami s divokým typem a amplifikovaným HER2, což dále podtrhuje ústřední roli tohoto modelu v této oblasti.

Mechanismy rezistence na TKI EGFR

Klíčovým uplatněním linie NCI-H1781 je modelování intrinsické rezistence vůči TKI EGFR první generace. Wang a jeho kolegové prokázali, že inzerce YVMA v genu HER2 způsobuje transfosforylaci jak kinázově neaktivního, tak divokého typu EGFR i v přítomnosti TKI EGFR, což vysvětluje, proč gefitinib a erlotinib nedokážou potlačit signalizaci v této buněčné linii. [15] Potlačení mutovaného HER2 v buňkách H1781 obnovilo citlivost na TKI EGFR a zvýšilo apoptózu, což dokazuje, že HER2 v tomto kontextu působí jako primární faktor rezistence vůči TKI. [15]

Gadgeel a jeho kolegové potvrdili tento fenotyp rezistence porovnáním linie NCI-H1781 (EGFR divokého typu) s liniemi NSCLC s mutací EGFR v experimentech s duální blokádou EGFR a COX-2. [16] Data z linie NCI-H1781 prokázala, že souběžná léčba erlotinibem a celekoxibem nepřinesla žádný aditivní přínos u buněk s divokým typem EGFR, což zdůrazňuje, že stav mutace EGFR určuje odezvu na kombinační strategie zaměřené na EGFR. [16] Tyto poznatky učinily z linie NCI-H1781 cennou negativní kontrolu pro studie kombinované léčby zaměřené na EGFR.

Výzkum využívající deriváty (-)-epigallokatechin-3-galátu v kombinaci s cisplatinou nebo paklitaxelem dále použil linii NCI-H1781 jako srovnávací model NSCLC s divokým typem EGFR, přičemž zkoumal změny fosforylace v signální dráze EGFR. Tyto studie zjistily, že cytotoxické kombinace mohou potlačit signální přenos EGFR v navazujících fázích i při absenci aktivujících mutací EGFR. Tato souhrnná práce společně dokládá hodnotu této buněčné linie jako experimentální kontroly, která odděluje farmakologické účinky specifické pro HER2 od účinků specifických pro EGFR.

Výzkum konjugátů protilátek a léčiv a kombinované terapie

Linie NCI-H1781 byla použita ke zkoumání aktivity konjugátů protilátky a léčiva (ADC) namířených proti HER2 u NSCLC. Cretella a spolupracovníci prokázali, že trastuzumab emtansin (T-DM1), konjugát protilátky a léčiva sestávající z trastuzumabu konjugovaného s inhibitorem mikrotubulů DM1, vykazoval antiproliferační a proapoptotické účinky v liniích NSCLC s nadměrnou expresí HER2 a in vitro překonal rezistenci na gefitinib. [17] Tato práce patřila mezi první, které systematicky zkoumaly aktivitu T-DM1 u rakoviny plic namísto rakoviny prsu, přičemž linie NCI-H1781 poskytla kontext adenokarcinomu plic s mutací HER2. [17]

Wang a spolupracovníci prokázali, že klasické látky zaměřené na HER2, včetně lapatinibu, trastuzumabu a nevratného pan-HER inhibitoru CI-1033, všechny inhibovaly růst buněk NCI-H1781, čímž potvrdili existenci více mechanistických přístupů k potlačení HER2. [15] Tyto srovnávací údaje byly klíčové pro definování spektra látek účinných proti inzercím v exonu 20 genu HER2. Přístupy síťové farmakologie rovněž využily kmen NCI-H1781 jako in vitro model NSCLC k hodnocení životaschopnosti, apoptózy a klonogenity po kombinované léčbě novými sloučeninami rostlinného původu, což ilustruje univerzálnost tohoto modelu pro screening různých terapeutických modalit.

Genomické a proteomické profilování napříč nádorovými typy

NCI-H1781 je jednou z rozsáhle anotovaných linií v rámci rozsáhlých zdrojů nádorových buněčných linií. Encyklopedie rakovinných buněčných linií (Cancer Cell Line Encyclopedia) shromáždila údaje o genové expresi, počtu chromozomálních kopií a data z masivně paralelního sekvenování napříč stovkami buněčných linií, aby umožnila prediktivní modelování citlivosti na léky, přičemž NCI-H1781 přispěla jako zdokumentovaný model NSCLC. [2] Rozšíření CCLE nové generace přidalo vrstvy týkající se sestřihu RNA, metylace DNA, modifikace histonu H3 a exprese mikroRNA, čímž se dále prohloubil molekulární profil NCI-H1781. [8]

Proteomické studie doplnily genomické datové soubory pro NCI-H1781. Charakterizace pomocí proteinového pole s reverzní fází změřila úrovně exprese přibližně 230 klíčových proteinů souvisejících s rakovinou napříč více než 650 buněčnými liniemi, čímž prokázala, že profily fosfoproteinů zvyšují prediktivní schopnost ohledně citlivosti na léky nad rámec toho, co poskytují samotná data o mRNA. [7] Panonkologická proteomická mapa 949 lidských nádorových buněčných linií, vytvořená pomocí hmotnostní spektrometrie, dále kvantifikovala více než 8 000 proteinů, přičemž NCI-H1781 byl zařazen mezi zástupce NSCLC. [18]

Transkriptomické zdroje přinesly další rozlišení. Komplexní studie sekvenování RNA u 675 lidských nádorových buněčných linií katalogizovala genovou expresi, mutace a genové fúze, čímž poskytla transkripční referenci pro NCI-H1781, která podporuje analýzy založené na signálních drahách. [6] Zdroj TCLP tato data doplnil stanovením typu HLA, identifikací exprimovaných virů a predikcí neoepitopů ve více než 1 000 buněčných liniích včetně NCI-H1781, čímž otevřel nové možnosti pro výzkum související s imunoterapií. [19] Studie proteomického profilování rovněž identifikovaly odlišně aktivované signální dráhy mezi liniemi SCLC a NSCLC, přičemž linie NCI-H1781 sloužila jako referenční linie pro NSCLC. [20]

Screening nových sloučenin a farmakogenomika

Linie NCI-H1781 byla začleněna do rozsáhlých farmakogenomických screeningů, které mapují genetické změny ve vztahu k citlivosti na léky. Přehled farmakogenomických interakcí u více než 1 000 nádorových buněčných linií koreloval somatické mutace, změny počtu kopií, metylaci DNA a genovou expresi s citlivostí na 265 léčiv, přičemž linie NCI-H1781 poskytla data o vzorcích citlivosti zprostředkovaných HER2. [21] V rámci paradigmatu objevování léčiv založeného na chemickém přístupu (chemistry-first) byla provedeno screeningové testování knihovny 200 000 sloučenin na více než 100 buněčných modelech rakoviny plic, přičemž NCI-H1781 byl použit jako součást reprezentativního panelu charakteristických somatických lézí u rakoviny plic. [22]

Profilování závislosti na efektorech KRAS pomocí kombinatorických screeningů siRNA v 92 buněčných liniích zahrnovalo i NCI-H1781 s cílem charakterizovat, jak různé onkogenotypy zapojují odlišné efektorové uzly, což přispělo k širšímu pochopení heterogenity signálních drah u rakoviny plic. [10] Analýzy exprese genů souvisejících s RB u více než 100 linií NSCLC potvrdily neporušenou expresi RB v NCI-H1781, což poskytlo kontext pro studie regulace buněčného cyklu. [23] Kromě toho screening mikrodelecí v celém genomu identifikoval poruchy genů polaritního komplexu v 684 nádorových buněčných liniích, přičemž data z linie NCI-H1781 přispěla k charakterizaci potenciálních nových mechanismů nádorových supresorů. [9]

Odhad původu u téměř 1 400 nádorových buněčných linií zařadil linii NCI-H1781 do převážně evropského genetického pozadí, což je klasifikace relevantní pro interpretaci populačně specifických farmakogenomických nálezů a pro zajištění diverzity v panelech pro screening léčiv. [5] Souhrnně lze říci, že tyto farmakogenomické aplikace dokazují, že NCI-H1781 přispívá cennými datovými body specifickými pro HER2 v rámci rámců pro objevování léčiv na více buněčných liniích, což umožňuje výzkumníkům identifikovat genetické prediktory citlivosti nebo rezistence ve velkém měřítku.

Závěr

NCI-H1781 (CVCL_1494) představuje přední buněčný model pro NSCLC způsobený inzercí v exonu 20 genu HER2 a nabízí geneticky dobře definovanou platformu pro hodnocení cílených inhibitorů kináz, charakterizaci mechanismů rezistence a přispívá k panonkologickým multiomickým konsorciím. Od přelomového prokázání aktivity HKI-272 v roce 2006 [12] až po současné studie reverzibilních inhibitorů HER2 a konjugátů protilátek s léčivy tato buněčná linie opakovaně prokázala svůj translační význam. Její rozsáhlá anotace v genomické, transkriptomické a proteomické rovině rozšiřuje její užitečnost daleko za hranice farmakologie zaměřené na jediný cíl, což z ní činí univerzální nástroj v moderní výbavě pro výzkum biologie rakoviny. Výzkumníci, kteří hledají ověřenou zásobu NCI-H1781 podrobenou přísné kontrole kvality s potvrzenou životaschopností po rozmrazení nad 97 %, si mohou tuto buněčnou linii objednat nebo se na její specifikace zeptat přímo na cytion.com.

Klíčové publikace

1. Phelps RM, Johnson BE, Ihde DC (1996) Databáze buněčných linií NCI-Navy Medical Oncology Branch. Journal of cellular biochemistry. Supplement. PMID: 8806092
2. Barretina J, Caponigro G, Stransky N (2012) Encyklopedie nádorových buněčných linií umožňuje prediktivní modelování citlivosti na protinádorová léčiva. Nature. PMID: 22460905
3. Mulshine JL, Ujhazy P, Antman M (2020) Od klinických vzorků k preklinickým modelům lidského karcinomu – cesta databáze buněčných linií NCI – o 25 let později. Journal of cellular biochemistry. PMID: 31803961
4. Mitsudomi T, Steinberg SM, Nau MM (1992) Mutace genu p53 v buněčných liniích nemalobuněčného karcinomu plic a jejich korelace s přítomností mutací genu ras a klinickými rysy. Oncogene. PMID: 1311061
5. Dutil J, Chen Z, Monteiro AN (2019) Interaktivní zdroj pro zkoumání genetické rozmanitosti a odhadovaného původu v nádorových buněčných liniích. Cancer research. PMID: 30894373
6. Klijn C, Durinck S, Stawiski EW (2015) Komplexní transkripční profil lidských nádorových buněčných linií. Nature Biotechnology. PMID: 25485619
7. Li J, Zhao W, Akbani R (2017) Charakterizace lidských nádorových buněčných linií pomocí proteinových čipů s reverzní fází. Cancer Cell. PMID: 28196595
8. Ghandi M, Huang FW, Jané-Valbuena J (2019) Charakterizace Encyklopedie nádorových buněčných linií nové generace. Nature. PMID: 31068700
9. Rothenberg SM, Mohapatra G, Rivera MN (2010) Genomové screeningové vyšetření mikrodelecí odhaluje narušení genů polaritního komplexu u různých typů lidských nádorů. Cancer Research. PMID: 20215515
10. Yuan TL, Amzallag A, Bagni R (2018) Diferenciální zapojení efektorů onkogenním KRAS. Cell Reports. PMID: 29444439
11. Yu M, Selvaraj SK, Liang-Chu MM (2015) Zdroj pro ověřování, anotaci a kontrolu kvality buněčných linií. Nature. PMID: 25877200
12. Shimamura T, Ji H, Minami Y (2006) Nemalobuněčný karcinom plic a transformované buňky Ba/F3 nesoucí mutaci ERBB2 G776insV_G/C jsou citlivé na HKI-272, inhibitor s dvojitou specifitou pro receptor epidermálního růstového faktoru a ERBB2. Cancer Research. PMID: 16818618
13. Suzuki T, Fujii A, Ohya J (2009) Protinádorová aktivita duálního inhibitoru receptoru epidermálního růstového faktoru a kinázy ErbB2 MP-412 (AV-412) v myších modelech s xenotransplantáty. Cancer Science. PMID: 19459856
14. Koga T, Suda K, Nishino M (2021) Aktivita a mechanismus získané rezistence na tarloxotinib u plicního karcinomu s mutací HER2: studie in vitro. Translational lung cancer research. PMID: 34584864
15. Wang SE, Narasanna A, Perez-Torres M (2006) Mutace v kinázové doméně HER2 vede ke konstitutivní fosforylaci a aktivaci HER2 a EGFR a k rezistenci vůči inhibitorům tyrozinkinázy EGFR. Cancer Cell. PMID: 16843263
16. Gadgeel SM, Ali S, Philip PA (2007) Odpověď na duální blokádu receptoru epidermálního růstového faktoru (EGFR) a cyklooxygenázy-2 u nemalobuněčného karcinomu plic může záviset na mutačním statusu EGFR v nádoru. Cancer. PMID: 17948911
17. Cretella D, Saccani F, Quaini F (2014) Trastuzumab emtansin je účinný na buněčné linie NSCLC s nadměrnou expresí HER-2 a překonává rezistenci na gefitinib. Molecular Cancer. PMID: 24898067
18. Gonçalves E, Poulos RC, Cai Z (2022) Pan-rakovinová proteomická mapa 949 lidských buněčných linií. Cancer Cell. PMID: 35839778
19. Scholtalbers J, Boegel S, Bukur T (2015) TCLP: online katalog nádorových buněčných linií integrující typ HLA, predikované neoepitopy, viry a genovou expresi. Genome Medicine. PMID: 26589293
20. Byers LA, Wang J, Nilsson MB (2012) Proteomické profilování identifikuje dysregulované signální dráhy u malobuněčného karcinomu plic a nové terapeutické cíle, včetně PARP1. Cancer discovery. PMID: 22961666
21. Iorio F, Knijnenburg TA, Vis DJ (2016) Přehled farmakogenomických interakcí u rakoviny. Cell. PMID: 27397505
22. McMillan EA, Ryu MJ, Diep CH (2018) Přístup „Chemistry-First“ pro návrh personalizované léčby u rakoviny plic. Cell. PMID: 29681454
23. Modi S, Kubo A, Oie H (2000) Exprese proteinů z rodiny genů souvisejících s RB a velkého T-antigenu SV40 u mezoteliomu a rakoviny plic. Oncogene. PMID: 11030152
24. Robichaux JP, Elamin YY, Tan Z (2018) Mechanismy a klinická účinnost inhibitoru kinázy selektivního pro exon 20 genů EGFR a HER2 u nemalobuněčného karcinomu plic. Nature Medicine. PMID: 29686424