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3T3-L1
Tessuto
Embrionale
Sito metastatico
Non applicabile (preadipociti embrionali; non tumorigenici)
Sinonimi
3T3 L1, 3T3L1, 3T3-L1 ad, NIH-3T3-L1, NIH3T3-L1

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3T3-L1

Cell line · Codice prodotto 400107

3T3-L1 cells are a clonal line of preadipocytes derived from mouse embryonic fibroblasts. These cells have become a widely used in vitro model for studyin...

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01Informazioni generali

Descrizione

le cellule 3T3-L1 sono una linea clonale di preadipociti derivati da fibroblasti embrionali di topo. Queste cellule sono diventate un modello in vitro ampiamente utilizzato per studiare il processo di adipogenesi, compresa l'adipogenesi e la lipogenesi, ovvero la differenziazione dei preadipociti in adipociti (cellule grasse). Il nome "3T3" si riferisce al protocollo di trasferimento (T) che prevedeva il trasferimento delle cellule ogni 3 giorni, mentre "L1" indica il particolare clone che è stato isolato.

Inizialmente, le cellule 3T3-L1 presentano una morfologia simile a quella dei fibroblasti, ma dopo l'induzione della differenziazione cellulare 3T3-L1 passano dallo stato di preadipociti a quello di adipociti maturi e accumulano gocce lipidiche, un segno distintivo dell'obesità e della sindrome metabolica. Il processo di differenziazione da preadipociti 3T3-L1 ad adipociti 3T3-L1 è innescato da uno specifico cocktail di induttori, che in genere comprende desametasone, 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) e insulina.

Quando gli adipociti 3T3-L1 adottano le caratteristiche degli adipociti maturi, iniziano a esprimere geni cruciali per la funzione degli adipociti, come quelli che codificano per gli enzimi coinvolti nel metabolismo degli acidi grassi e per ormoni come la leptina e l'adiponectina, che giocano ruoli vitali nella regolazione dell'appetito, del bilancio energetico e della sensibilità all'insulina. Lo studio delle trasformazioni delle cellule 3T3-L1 migliora la nostra comprensione dell'adipogenesi, dell'obesità e delle malattie legate al grasso, come il diabete di tipo 2, rivelando come l'accumulo di lipidi negli adipociti porti a disfunzioni cellulari e a problemi metabolici più ampi.

Inoltre, la linea cellulare 3T3-L1 è fondamentale per studiare l'impatto di varie sostanze sul comportamento degli adipociti, come l'effetto di agenti farmacologici sulla lipolisi o le proprietà antinfiammatorie di alcune diete che possono prevenire l'insulino-resistenza.

le cellule 3T3-L1 sono state ampiamente utilizzate per studiare i meccanismi molecolari e cellulari alla base del differenziamento degli adipociti, della sensibilità all'insulina, del metabolismo lipidico e degli effetti di vari agenti nutrizionali e farmacologici su questi processi. Grazie alla loro capacità di differenziarsi in adipociti e alla facilità di coltura in vitro, le cellule 3T3-L1 rappresentano un valido sistema modello per la ricerca sull'obesità e sul diabete, nonché per la scoperta di nuovi bersagli terapeutici legati alle malattie metaboliche

Tessuto
Embrionale
Sito metastatico
Non applicabile (preadipociti embrionali; non tumorigenici)
Applicazioni
le cellule 3T3-L1 sono state utilizzate come sistema modello per comprendere i meccanismi molecolari che regolano l'adipogenesi e il metabolismo lipidico e sono state impiegate nella ricerca sull'obesità, il diabete e le malattie metaboliche. Sono anche un valido ospite per la trasfezione.
Sinonimi
  • 3T3 L1
  • 3T3L1
  • 3T3-L1 ad
  • NIH-3T3-L1
  • NIH3T3-L1

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
Senza OGM
Dettagli sullo stato degli OGM
No genetic modification; 3T3-L1 is a subclone of the NIH/3T3 line selected for adipogenic differentiation potential; no introduced transgene
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile a un fibroblasto
Tipo di cellula
Preadipocita / adipocita (dopo la differenziazione)
Tumorigenico
No
Stato di ploidia
Aneuploide
Cariotipo
2n=40

04Identificatori

Riferimento bibliografico
3T3-L1 (catalogo Cytion numero 400107)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_0123

05Espressione e suscettibilità

Suscettibilità ai virus
Virus della leucemia murina, virus del sarcoma murino, stomatite vescicolare, vaccinia, herpes simplex, oncornavirus N-tropi C
Prodotti
Insulina, collagene, trigliceridi

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rapporto di frazionamento
Da 1 a 5
Densità di semina
da 1 a 3 × 10⁴ cellule/cm²
Rinnovo dei fluidi
Ogni 2 o 3 giorni
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
Svizzero albino
Età dei donatori
Embrione