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HSF(SV40)
Sito metastatico
Non applicabile (fibroblasto splenico normale; immortalizzato con SV40)

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HSF(SV40)

Cell line · Codice prodotto 305338

The HSF(SV40) immortalized cell line refers to cells that have been genetically modified to express the Simian Virus 40 (SV40) large T-antigen (T-Ag), whi...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare immortalizzata HSF(SV40) si riferisce a cellule geneticamente modificate per esprimere l'antigene T grande (T-Ag) del Simian Virus 40 (SV40), che facilita l'immortalizzazione cellulare. L'SV40 T-Ag è una potente oncoproteina che interagisce con le proteine soppressorie del tumore, come la p53 e la proteina retinoblastoma (Rb), portando all'inattivazione delle loro funzioni di soppressione del tumore. Questa interazione interrompe i normali meccanismi di controllo del ciclo cellulare, consentendo alle cellule di aggirare la senescenza e di proliferare indefinitamente.

Grazie alla loro natura immortale e al coinvolgimento critico del T-Ag di SV40 nella loro trasformazione, le cellule HSF(SV40) sono ampiamente utilizzate nella ricerca sul cancro, in particolare negli studi relativi all'oncogenesi virale, alla regolazione del ciclo cellulare e agli interventi terapeutici mirati ai chaperoni molecolari e alle vie di soppressione tumorale. Il loro utilizzo fornisce preziose indicazioni sull'interazione tra le oncoproteine virali e le reti di regolazione delle cellule ospiti, aprendo la strada allo sviluppo di terapie antitumorali mirate.

Sito metastatico
Non applicabile (fibroblasto splenico normale; immortalizzato con SV40)
Applicazioni
Oncogenesi dell'SV40; biologia dei soppressori tumorali p53/Rb; regolazione del ciclo cellulare; biologia dei fibroblasti; biologia del cancro

02Classificazione

Organismo
Umano
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This HSF fibroblast line contains an SV40 T-antigen construct enabling immortalization for dermal and connective tissue studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile a un fibroblasto
Tipo di cellula
Fibroblasti
Tempo di raddoppio
circa da 24 a 36 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HSF(SV40) (numero di catalogo Cytion 305338)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
Not assigned

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Lavare con PBS, aggiungere Accutase (8–10 min a temperatura ambiente), risospendere, centrifugare a 300×g per 3 min, riseminare.
Rapporto di frazionamento
da 1 a 3
Densità di semina
da 1 a 3 × 10⁴ cellule/cm²
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.