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L Wnt-3A
Tessuto
Tessuto connettivo sottocutaneo, areolare e adiposo
Sinonimi
L-Wnt-3A, L-Wnt3A, LWnt3A, LWnt-3A

Documenti

L Wnt-3A

Cell line · Codice prodotto 305184

The L Wnt-3A cell line is a derivative of the L cells, originally derived from mouse fibroblast cells. This cell line is specifically engineered to stably...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare L Wnt-3A è un derivato delle cellule L, originariamente derivate da fibroblasti di topo. Questa linea cellulare è specificamente ingegnerizzata per esprimere stabilmente la proteina Wnt-3A, un componente critico della via di segnalazione Wnt. La segnalazione Wnt è fondamentale per vari processi di sviluppo, tra cui la proliferazione, la differenziazione e la migrazione cellulare. L'espressione stabile di Wnt-3A in questa linea cellulare la rende uno strumento prezioso per studiare i meccanismi molecolari alla base di questi processi biologici, in particolare nel contesto della ricerca sul cancro, della rigenerazione dei tessuti e dello sviluppo embrionale.

I ricercatori utilizzano spesso la linea cellulare L Wnt-3A per produrre un mezzo condizionato ricco di Wnt-3A, che può essere utilizzato per attivare la segnalazione Wnt in altri tipi di cellule. Questa applicazione è particolarmente utile nello studio della biologia delle cellule staminali e della medicina rigenerativa, dove la segnalazione di Wnt svolge un ruolo fondamentale nel mantenere la pluripotenza delle cellule staminali e nel promuovere la riparazione dei tessuti. Inoltre, la linea cellulare serve come modello per studiare la disregolazione della segnalazione Wnt in vari tipi di cancro, fornendo indicazioni su potenziali bersagli terapeutici e trattamenti.

Grazie all'espressione robusta e affidabile di Wnt-3A, la linea cellulare L Wnt-3A è ampiamente utilizzata nei laboratori per esplorare gli effetti della segnalazione Wnt su diversi processi cellulari. È una risorsa indispensabile per gli scienziati che mirano a svelare le complessità delle funzioni cellulari mediate da Wnt e a sviluppare nuove strategie per modulare questa via in contesti patologici.

Tessuto
Tessuto connettivo sottocutaneo, areolare e adiposo
Sinonimi
  • L-Wnt-3A
  • L-Wnt3A
  • LWnt3A
  • LWnt-3A

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This murine L-cell-derived line (L Wnt-3A) contains a Wnt3a expression construct under PGK promoter control with neomycin resistance, enabling secretion of Wnt3a. The insert is stably integrated into L-cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Fibroblasti

04Identificatori

Riferimento bibliografico
L Wnt-3A (numero di catalogo Cytion 305184)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_0635

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
Wnt-3A

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS, 0,4 mg/mL di G-418
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
C3H/An
Età dei donatori
100 giorni