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L Wnt-3A
Tecido
Tecido conjuntivo subcutâneo, areolar e adiposo
Sinónimos
L-Wnt-3A, L-Wnt3A, LWnt3A, LWnt-3A

Documentos

L Wnt-3A

Cell line · Número do produto 305184

The L Wnt-3A cell line is a derivative of the L cells, originally derived from mouse fibroblast cells. This cell line is specifically engineered to stably...

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01Informações gerais

Descrição

A linha celular L Wnt-3A é um derivado das células L, originalmente derivadas de células de fibroblastos de ratinho. Esta linha celular foi especificamente concebida para expressar de forma estável a proteína Wnt-3A, um componente crítico da via de sinalização Wnt. A sinalização Wnt é crucial para vários processos de desenvolvimento, incluindo a proliferação, diferenciação e migração celular. A expressão estável da Wnt-3A nesta linha celular torna-a uma ferramenta valiosa para o estudo dos mecanismos moleculares subjacentes a estes processos biológicos, particularmente no contexto da investigação do cancro, da regeneração de tecidos e do desenvolvimento embrionário.

Os investigadores utilizam frequentemente a linha celular L Wnt-3A para produzir um meio condicionado rico em Wnt-3A, que pode depois ser utilizado para ativar a sinalização Wnt noutros tipos de células. Esta aplicação é especialmente benéfica no estudo da biologia das células estaminais e da medicina regenerativa, onde a sinalização Wnt desempenha um papel fundamental na manutenção da pluripotência das células estaminais e na promoção da reparação dos tecidos. Além disso, a linha celular serve de modelo para investigar a desregulação da sinalização Wnt em vários cancros, fornecendo informações sobre potenciais alvos terapêuticos e tratamentos.

Devido à expressão robusta e fiável de Wnt-3A, a linha celular L Wnt-3A é amplamente utilizada em laboratórios para explorar os efeitos da sinalização Wnt em diferentes processos celulares. É um recurso indispensável para os cientistas que pretendem desvendar as complexidades das funções celulares mediadas por Wnt e desenvolver novas estratégias para modular esta via em contextos de doença.

Tecido
Tecido conjuntivo subcutâneo, areolar e adiposo
Sinónimos
  • L-Wnt-3A
  • L-Wnt3A
  • LWnt3A
  • LWnt-3A

02Classificação

Organismo
Rato
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This murine L-cell-derived line (L Wnt-3A) contains a Wnt3a expression construct under PGK promoter control with neomycin resistance, enabling secretion of Wnt3a. The insert is stably integrated into L-cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Fibroblastos

04Identificadores

Referência
L Wnt-3A (número de catálogo da Cytion 305184)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_0635

05Expressão e suscetibilidade

Expressão proteica
Wnt-3A

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Suplementar o meio com 10% de FBS, 0,4 mg/mL de G-418
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Raça / subespécie
C3H/An
Idade do dador
100 dias