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NCM460
Gewebe
Dickdarm, Schleimhaut
Krankheit
Normal
Synonyme
NCM-460

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NCM460

Cell line · Artikelnummer 305430

The NCM460 cell line is derived from normal human colon mucosal epithelial cells, providing a critical in vitro model for studying human intestinal physio...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die Zelllinie NCM460 wird aus normalen menschlichen Dickdarmschleimhautepithelzellen gewonnen und stellt ein wichtiges In-vitro-Modell für die Untersuchung der Physiologie und Pathologie des menschlichen Darms dar. Diese Zelllinie wurde aus histologisch normalem Gewebe hergestellt, das bei der Operation eines Magenkrebspatienten isoliert wurde, und zwar aus dem Rand des Querdarmes, der als frei von bösartigen Veränderungen gilt. NCM460-Zellen weisen typische Merkmale von gastrointestinalen Epithelzellen auf, darunter die Expression von Markern wie Villin und der menschlichen sekretorischen Komponente, was ihren epithelialen Ursprung bestätigt. Wichtig ist, dass diese Zellen einen nicht-tumorigenen Phänotyp beibehalten, wie ihre Unfähigkeit, in Weichagar zu wachsen, und das Fehlen von Tumorbildung in Nacktmäusen zeigen.

Die Kultur von NCM460-Zellen erfordert spezielle Bedingungen, um ihr Wachstum als gemischtes Suspensions-Monolayer-System zu unterstützen, das verschiedene Stadien der epithelialen Differenzierung widerspiegelt. Das Vorhandensein von Muzin-positiven Zellen und die Expression neuroendokriner Marker in einigen Subpopulationen deutet auf eine beibehaltene Multilinearität hin, was auf eine stammähnliche Komponente innerhalb der Zellpopulation hinweist. Diese Eigenschaft macht NCM460 besonders nützlich für Studien zur Zelldifferenzierung, zum Medikamententransport und zu epithelialen Barrierefunktionen.

NCM460 wurde in der Forschung mit Schwerpunkt auf dem Fortschreiten von Dickdarmkrebs weithin eingesetzt und ermöglicht Vergleiche zwischen normalen und erkrankten Epithelzellen. Sie dient auch als Plattform für die Untersuchung der Auswirkungen von Nahrungsbestandteilen, Arzneimitteln und anderen externen Faktoren auf die Gesundheit und Krankheit von Darmepithelzellen. Diese Zelllinie bietet ein robustes Instrument, um unser Verständnis der gastrointestinalen Biologie auf zellulärer und molekularer Ebene zu verbessern.

Gewebe
Dickdarm, Schleimhaut
Krankheit
Normal
Synonyme
  • NCM-460

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Zelltyp
Epithelzelle
Tumorauslösend
Nein, getestet an Nacktmäusen und athymischen Mäusen
Verdopplungszeit
32-38 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
NCM460 (Cytion-Katalognummer 305430)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_0460

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10 % FBS und 1 % NEAA.
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Alter des Spenders
68 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Hispanisch