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NCM460
Tessuto
Colon, mucosa
Malattia
Normale
Sinonimi
NCM-460

Documenti

NCM460

Cell line · Codice prodotto 305430

The NCM460 cell line is derived from normal human colon mucosal epithelial cells, providing a critical in vitro model for studying human intestinal physio...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare NCM460 deriva da cellule epiteliali normali della mucosa del colon umano, fornendo un modello in vitro fondamentale per lo studio della fisiologia e della patologia intestinale umana. Questa linea cellulare è stata creata a partire da tessuto istologicamente normale isolato durante un intervento chirurgico da un paziente affetto da cancro gastrico, in particolare dal margine del colon trasverso considerato privo di alterazioni maligne. Le cellule NCM460 presentano caratteristiche tipiche delle cellule epiteliali gastrointestinali, tra cui l'espressione di marcatori come la villina e la componente secretoria umana, a conferma della loro origine epiteliale. È importante notare che queste cellule mantengono un fenotipo non tumorale, come dimostrato dalla loro incapacità di crescere in soft agar e dalla mancanza di formazione di tumori in topi nudi.

La coltura delle cellule NCM460 richiede condizioni specializzate per sostenere la loro crescita come sistema misto sospensione-monostrato, che riflette vari stadi di differenziazione epiteliale. La presenza di cellule positive alla mucina e l'espressione di marcatori neuroendocrini in alcune sottopopolazioni suggeriscono una capacità multilineare conservata, indicativa di una componente staminale all'interno della popolazione cellulare. Questa proprietà rende NCM460 particolarmente utile per studi sulla differenziazione cellulare, sul trasporto di farmaci e sulle funzioni di barriera epiteliale.

NCM460 è stato ampiamente applicato nella ricerca sulla progressione del cancro del colon, consentendo il confronto tra cellule epiteliali normali e malate. Serve anche come piattaforma per studiare gli effetti di componenti dietetici, farmaci e altri fattori esterni sulla salute e sulla malattia dell'epitelio del colon. Questa linea cellulare offre un solido strumento per migliorare la comprensione della biologia gastrointestinale a livello cellulare e molecolare.

Tessuto
Colon, mucosa
Malattia
Normale
Sinonimi
  • NCM-460

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tipo di cellula
Cellula epiteliale
Tumorigenico
No, testato su topi nudi e topi atimici
Tempo di raddoppio
32-38 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
NCM460 (numero di catalogo Cytion 305430)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0460

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Aggiungere al mezzo il 10% di FBS e l'1% di NEAA.
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
68 anni
Etnia
Ispanico