Siirry sisältöön
NCM460
Kudos
Paksusuoli, limakalvo
Sairaus
Normaali
Synonyymit
NCM-460

Asiakirjat

NCM460

Cell line · Tuotenumero 305430

The NCM460 cell line is derived from normal human colon mucosal epithelial cells, providing a critical in vitro model for studying human intestinal physio...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

NCM460-solulinja on peräisin ihmisen normaalista paksusuolen limakalvon epiteelisoluista, ja se tarjoaa kriittisen in vitro -mallin ihmisen suoliston fysiologian ja patologian tutkimiseen. Tämä solulinja perustettiin histologisesti normaalista kudoksesta, joka eristettiin mahasyöpäpotilaan leikkauksen aikana, erityisesti paksusuolen poikkileikkauksen marginaalista, jota pidettiin vapaana pahanlaatuisista muutoksista. NCM460-soluilla on ruoansulatuskanavan epiteelisoluille tyypillisiä ominaisuuksia, kuten villinin ja ihmisen erittävän komponentin kaltaisten merkkiaineiden ilmentyminen, mikä vahvistaa niiden epiteeliperäisyyden. Tärkeää on, että nämä solut säilyttävät kasvaimia aiheuttamattoman fenotyypin, kuten niiden kyvyttömyys kasvaa pehmeässä agarissa ja kasvainten muodostumisen puuttuminen alastomilla hiirillä osoittaa.

NCM460-solujen viljely vaatii erikoistuneita olosuhteita, jotta niiden kasvua voidaan tukea sekasuspensio-monokerros-järjestelmänä, joka heijastaa epiteelin erilaistumisen eri vaiheita. Mysiinipositiivisten solujen esiintyminen ja neuroendokriinisten merkkiaineiden ilmentyminen joissakin osapopulaatioissa viittaa siihen, että solupopulaatiossa on säilynyt monilinjainen kyky, mikä viittaa kantasolujen kaltaiseen komponenttiin. Tämä ominaisuus tekee NCM460:stä erityisen hyödyllisen solujen erilaistumista, lääkekuljetusta ja epiteelin esteen toimintaa koskevissa tutkimuksissa.

NCM460:tä on sovellettu laajalti paksusuolen syövän etenemiseen keskittyvässä tutkimuksessa, mikä mahdollistaa normaalien ja sairaiden epiteelisolujen vertailun. Se toimii myös alustana, jolla tutkitaan ravinnon komponenttien, lääkkeiden ja muiden ulkoisten tekijöiden vaikutuksia paksusuolen epiteelin terveyteen ja sairauteen. Tämä solulinja tarjoaa vankan välineen, jonka avulla voidaan lisätä ymmärrystä ruoansulatuskanavan biologiasta solu- ja molekyylitasolla.

Kudos
Paksusuoli, limakalvo
Sairaus
Normaali
Synonyymit
  • NCM-460

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Mies
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteelin kaltainen
Solutyyppi
Epiteelisolu
Kasvaimia aiheuttava
Ei, testattu alastomilla hiirillä ja athymic-hiirillä
Kaksinkertaistumisaika
32-38 tuntia

04Tunnisteet

Lähdeviite
NCM460 (Cytionin luettelonumero 305430)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_0460

05Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Lisää väliaineeseen 10 % FBS ja 1 % NEAA.
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

07Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
68 vuotta
Etnisyys
Hispanic