Mine otse sisu juurde
NCM460
Kude
Jämesool, limaskest
Haigus
Tavaline
Sünonüümid
NCM-460

Dokumendid

NCM460

Cell line · Toote number 305430

The NCM460 cell line is derived from normal human colon mucosal epithelial cells, providing a critical in vitro model for studying human intestinal physio...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

NCM460 rakuliin on saadud inimese normaalsetest käärsoole limaskesta epiteelirakkudest, mis on oluline in vitro mudel inimese soolestiku füsioloogia ja patoloogia uurimiseks. See rakuliin loodi histoloogiliselt normaalsest koest, mis isoleeriti maovähiga patsiendi operatsiooni käigus, täpsemalt pahaolulistest muutustest vabaks peetavast põikikoolo servast. NCM460 rakkudel on seedetrakti epiteelirakkudele iseloomulikud omadused, sealhulgas selliste markerite nagu villiin ja inimese sekretoorne komponent ekspressioon, mis kinnitab nende epiteelialast päritolu. Oluline on see, et need rakud säilitavad mittetuumoriseeriva fenotüübi, mida näitab nende võimetus kasvada pehmel agaril ja kasvajate moodustumise puudumine alasti hiirtel.

NCM460 rakkude kasvatamiseks on vaja spetsiaalseid tingimusi, et toetada nende kasvu segasuspensiooni ja monokihi süsteemina, mis peegeldab epiteeli diferentseerumise erinevaid staadiume. Mütsiinipositiivsete rakkude olemasolu ja neuroendokriinsete markerite ekspressioon mõnes alampopulatsioonis viitab säilitatud multiliineerimisvõimele, mis viitab tüvelise komponendi olemasolule rakupopulatsioonis. See omadus muudab NCM460 eriti kasulikuks rakkude diferentseerumise, ravimitranspordi ja epiteeli barjääri funktsioonide uurimisel.

NCM460 on laialdaselt rakendatud uuringutes, mis keskenduvad käärsoolevähi progresseerumisele, võimaldades võrdlusi normaalsete ja haigete epiteelirakkude vahel. Samuti on see platvormiks, mille abil saab uurida toitumiskomponentide, ravimite ja muude väliste tegurite mõju jämesoole epiteeli tervisele ja haigustele. See rakuliin pakub tugevat vahendit seedetrakti bioloogia mõistmise edendamiseks raku- ja molekulaarsel tasandil.

Kude
Jämesool, limaskest
Haigus
Tavaline
Sünonüümid
  • NCM-460

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Rakutüüp
Epiteelirakk
Tuumorigeenne
Ei, testitud alasti hiirtel ja atüümsetel hiirtel
Kahekordistumisaeg
32-38 tundi

04Tunnused

Viide
NCM460 (Cytioni katalooginumber 305430)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_0460

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendage keskkonda 10% FBS-i ja 1% NEAA-ga.
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

07Annetaja

Doonori vanus
68 aastat
Etniline kuuluvus
Hispaanlased