Ir diretamente para o conteúdo
NCM460
Tecido
Cólon, mucosa
Doença
Normal
Sinónimos
NCM-460

Documentos

NCM460

Cell line · Número do produto 305430

The NCM460 cell line is derived from normal human colon mucosal epithelial cells, providing a critical in vitro model for studying human intestinal physio...

€800.00sem impostos nem portes de envio
Em stock
Lote
Recomendado (lote mais recente)
  • CoA
1

01Informações gerais

Descrição

A linha celular NCM460 é derivada de células epiteliais normais da mucosa do cólon humano, constituindo um modelo in vitro fundamental para o estudo da fisiologia e patologia intestinais humanas. Esta linha celular foi estabelecida a partir de tecido histologicamente normal isolado durante a cirurgia de um doente com cancro gástrico, especificamente a partir da margem transversal do cólon considerada isenta de alterações malignas. As células NCM460 apresentam caraterísticas típicas das células epiteliais gastrointestinais, incluindo a expressão de marcadores como a vilina e o componente secretor humano, confirmando a sua origem epitelial. É importante notar que estas células mantêm um fenótipo não tumorigénico, como demonstrado pela sua incapacidade de crescer em ágar mole e pela ausência de formação de tumores em ratinhos nus.

A cultura de células NCM460 requer condições especializadas para suportar o seu crescimento como um sistema misto de suspensão-monocamada, reflectindo diferentes fases de diferenciação epitelial. A presença de células positivas para mucina e a expressão de marcadores neuroendócrinos nalgumas subpopulações sugerem uma capacidade de manutenção de múltiplas linhagens, o que indica a existência de um componente de tipo estaminal na população de células. Esta propriedade torna a NCM460 particularmente útil para estudos sobre diferenciação celular, transporte de fármacos e funções de barreira epitelial.

A NCM460 tem sido amplamente aplicada em investigação centrada na progressão do cancro do cólon, permitindo comparações entre células epiteliais normais e doentes. Serve também como plataforma para investigar os efeitos de componentes dietéticos, produtos farmacêuticos e outros factores externos na saúde e na doença do epitélio do cólon. Esta linha celular oferece uma ferramenta robusta para fazer avançar a nossa compreensão da biologia gastrointestinal a nível celular e molecular.

Tecido
Cólon, mucosa
Doença
Normal
Sinónimos
  • NCM-460

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Célula epitelial
Tumorigénico
Não, testado em ratinhos nus e ratinhos atímicos
Tempo de duplicação
32-38 horas

04Identificadores

Referência
NCM460 (número de catálogo Cytion 305430)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_0460

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Suplementar o meio com 10% de FBS e 1% de NEAA.
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Idade do dador
68 anos
Etnia
Hispânico