Mine otse sisu juurde
2V6.11
Kude
Loote neerud
Metastaaside asukoht
Ei kohaldata (loote neer; mittetumorigeenne HEK293-derivaat)

Dokumendid

2V6.11

Cell line · Toote number 305147

2V6.11 rakud saadi 2001. aastal inimese embrüonaalsest neerurakuliinist HEK-293. 2V6.11 rakuliin on väärtuslik ressurss adenoviiruse E4 uurimiseks...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

2v6.11 rakud on saadud 2001. aastal inimese embrüonaalsest neeruliinist HEK-293. Rakuliin 2V6.11 on väärtuslik ressurss adenoviiruse E4 onkoproteiini, eriti E4 34K valgu uurimiseks, mis teadaolevalt osaleb raku genoomi säilitamises ja parandamises. 2V6.11 rakud, mis on saadud plasmiidi pVgRxR ja seejärel pEKORF6 transfektsiooniga, põhjustavad E4 34K valgu indutseeritavat ekspressiooni, mis on seotud DNA kahesooneliste katkestuste parandamise mehhanismide pärssimisega rakus. Rakuliin 2V6.11 näitas, et adenoviirivalgud E4 34k ja E1b 55k pärsivad kromosomaalse DNA parandamist, häirides mittehomoloogilist lõppliitumist (NHEJ) ja destabiliseerides DNA parandamise valke, laiendades oma mõju ekstrakromosomaalsest DNA-st rakulise genoomi DNA-le.

2V6.11 indutseeritav rakuliin, mille adherentne epiteelimorfoloogia on ideaalne neerust saadud epiteelirakkude käitumise ja omaduste uurimiseks, sealhulgas nende reaktsioon inimese adenoviiruse 40 infektsioonidele. See mitmekülgne rakuliin, mida saab tuvastada Western blot'i abil, võimaldab teadlastel uurida molekulaarseid mehhanisme, mille abil adenoviiruse E4 onkoproteiin inhibeerib remondiprotsesse, aidates seega kaasa meie arusaamisele adenoviiruse patoloogiast ja uute ravistrateegiate väljatöötamise võimalikkusest.

Kude
Loote neerud
Metastaaside asukoht
Ei kohaldata (loote neer; mittetumorigeenne HEK293-derivaat)
Rakendused
Adenoviiruse E4 onkoproteiini uuringud; DNA kahe ahela murru parandamise uuringud; NHEJ-signaalitee uuringud; indutseeritavad E4 34k ekspressioonisüsteemid; viroloogia; adenoviiruse patoloogia

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This HEK293-derived line contains an adenovirus 5 E4-34k expression construct controlled by an ecdysone-inducible promoter, enabling regulated E4 protein production. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
2

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed
Rakutüüp
Epiteelirakud

04Tunnused

Viide
2V6.11 (Cytioni katalooginumber 305147)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_6355

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytioni artikli number 820100a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS ja 1% NEAAga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Jagamissuhe
1–5
Külvitihedus
1–3 × 10⁴ rakku/cm²
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

07Annetaja

Doonori vanus
Loote