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2V6.11
Tecido
Rim fetal
Local da metástase
Não aplicável (rim fetal; derivado de HEK293 não tumorigénico)

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2V6.11

Cell line · Número do produto 305147

As células 2V6.11 foram derivadas da linha celular renal embrionária humana HEK-293 em 2001. A linha celular 2V6.11 constitui um recurso valioso para o estudo da proteína E4 adenoviral...

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01Informações gerais

Descrição

as células 2v6.11 foram derivadas da linha de rim embrionário humano HEK-293 em 2001. A linha celular 2V6.11 é um recurso valioso para o estudo da oncoproteína adenoviral E4, em particular da proteína E4 34K, conhecida por estar envolvida na manutenção e reparação do genoma celular. as células 2V6.11, obtidas por transfecção com o plasmídeo pVgRxR seguido de pEKORF6, resultam na expressão induzida da proteína E4 34K, que está associada à inibição dos mecanismos celulares de reparação das quebras de cadeia dupla no ADN. A linha de células 2V6.11 demonstrou que as proteínas adenovirais E4 34k e E1b 55k inibem a reparação do ADN cromossómico, perturbando a junção de extremidades não homólogas (NHEJ) e desestabilizando as proteínas de reparação do ADN, estendendo o seu efeito do ADN extracromossómico ao ADN genómico celular.

A linha celular induzível 2V6.11, com a sua morfologia epitelial aderente, é ideal para investigar o comportamento e as caraterísticas das células epiteliais derivadas do rim, incluindo a sua resposta a infecções por adenovírus humano 40. Esta linha celular versátil, que pode ser detectada por western blot, permite aos investigadores aprofundar os mecanismos moleculares através dos quais a oncoproteína E4 do adenovírus inibe os processos de reparação, contribuindo assim para a nossa compreensão da patologia do adenovírus e para o potencial desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas.

Tecido
Rim fetal
Local da metástase
Não aplicável (rim fetal; derivado de HEK293 não tumorigénico)
Aplicações
Estudos sobre a oncoproteína E4 do adenovírus; investigação sobre a reparação de quebras de cadeia dupla do ADN; estudos sobre a via NHEJ; sistemas de expressão induzível da E4 de 34k; virologia; patologia do adenovírus

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This HEK293-derived line contains an adenovirus 5 E4-34k expression construct controlled by an ecdysone-inducible promoter, enabling regulated E4 protein production. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
2

03Características

Morfologia
De tipo epitelial
Tipo de célula
Células epiteliais

04Identificadores

Referência
2V6.11 (número de catálogo da Cytion 305147)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_6355

05Manuseamento e cultura

Meio de cultura
EMEM (MEM Eagle), com: 2 mM L-Glutamina, com: 2,2 g/L NaHCO3, com: EBSS (número de artigo Cytion 820100a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS e 1% de NEAA
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Rácio de divisão
1 a 5
Densidade de sementeira
1 a 3 × 10⁴ células/cm²
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

07Doador

Idade do dador
Feto