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2V6.11
Tessuto
Rene fetale
Sito metastatico
Non applicabile (rene fetale; derivato non tumorigenico delle cellule HEK293)

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2V6.11

Cell line · Codice prodotto 305147

Le cellule 2V6.11 sono state ottenute dalla linea cellulare renale embrionale umana HEK-293 nel 2001. La linea cellulare 2V6.11 costituisce una preziosa risorsa per lo studio della proteina E4 adenovirale...

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01Informazioni generali

Descrizione

le cellule 2v6.11 sono state derivate dalla linea di rene embrionale umano HEK-293 nel 2001. La linea cellulare 2V6.11 è una risorsa preziosa per lo studio dell'oncoproteina adenovirale E4, in particolare della proteina E4 34K, nota per essere coinvolta nel mantenimento e nella riparazione del genoma cellulare. le cellule 2V6.11, ottenute mediante trasfezione con il plasmide pVgRxR seguito da pEKORF6, determinano l'espressione inducibile della proteina E4 34K, che è legata all'inibizione dei meccanismi cellulari che riparano le rotture a doppio filamento del DNA. La linea cellulare 2V6.11 ha dimostrato che le proteine adenovirali E4 34k e E1b 55k inibiscono la riparazione del DNA cromosomico interrompendo la giunzione delle estremità non omologhe (NHEJ) e destabilizzando le proteine di riparazione del DNA, estendendo il loro effetto dal DNA genomico extracromosomico a quello cellulare.

La linea cellulare inducibile 2V6.11, con la sua morfologia epiteliale aderente, è ideale per studiare il comportamento e le caratteristiche delle cellule epiteliali derivate dal rene, compresa la loro risposta alle infezioni da adenovirus 40 umano. Questa linea cellulare versatile, che può essere rilevata mediante western blot, consente ai ricercatori di approfondire i meccanismi molecolari con cui l'oncoproteina E4 dell'adenovirus inibisce i processi di riparazione, contribuendo così alla comprensione della patologia dell'adenovirus e al potenziale sviluppo di nuove strategie terapeutiche.

Tessuto
Rene fetale
Sito metastatico
Non applicabile (rene fetale; derivato non tumorigenico delle cellule HEK293)
Applicazioni
Studi sull'oncoproteina E4 dell'adenovirus; ricerca sulla riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA; studi sulla via NHEJ; sistemi di espressione inducibili dell'E4 da 34k; virologia; patologia dell'adenovirus

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This HEK293-derived line contains an adenovirus 5 E4-34k expression construct controlled by an ecdysone-inducible promoter, enabling regulated E4 protein production. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
2

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio
Tipo di cellula
Cellule epiteliali

04Identificatori

Riferimento bibliografico
2V6.11 (numero di catalogo Cytion 305147)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_6355

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rapporto di frazionamento
Da 1 a 5
Densità di semina
da 1 a 3 × 10⁴ cellule/cm²
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
Feto