Mine otse sisu juurde
HEp-2
Kude
Larynks
Haigus
Adenokartsinoom
Sünonüümid
Hep-2, HEP-2, HEp-2/HeLa, Hep 2, Hep2, HEp2, HEP2, H.Ep.-2, H.Ep. #2, H.Ep. No. 2, Hep II, Human Epidermoid carcinoma #2, Human Epithelioma-2

Dokumendid

HEp-2

Cell line · Toote number 300397

The HEp-2 cell line, originally believed to be derived from laryngeal cancer cells, was later identified through DNA fingerprinting and the presence of He...

€430.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta

Kohandamine / Soovitused

Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

HEp-2 rakuliin, mis algselt arvati olevat pärit kõhunäärmevähi rakkudest, tuvastati hiljem DNA sõrmejälgede ja HeLa marker-kromosoomide olemasolu kaudu, et see on saastunud HeLa rakkude, emakakaelavähist saadud rakuliiniga.

Sellele vaatamata kasutatakse HEp-2 rakuliini jätkuvalt laialdaselt kaudses immunofluorestsentsis, et tuvastada antituumaalseid antikehi (ANA), mis on võtmetähtsusega selliste haiguste nagu süsteemne erütematoosne luupus ja süsteemne skleroos diagnoosimisel. HEp-2 rakke kasutav kaudne immunofluorestsentsanalüüs (IIFA), mis annab selge positiivse või negatiivse tulemuse, on standardmeetod antituumaarsete antikehade testimiseks. See lihtne meetod on oluline erinevate süsteemsete autoimmuunhaiguste diagnoosimiseks ja klassifitseerimiseks.

HEp-2 rakkude kaudse immunofluorestsentsiga täheldatud autoantikehade mustrid, eriti reumatoloogia kontekstis, annavad hindamatut teavet erinevate reumaatiliste haiguste kohta. Lisaks sellele võimaldab HEp-2 inimrakkude poolt erinevates kultuuritingimustes ekspresseeritud antigeenide põhjalik ülevaade tuvastada spetsiifilisi ANAsid, mis on seotud selliste haigustega nagu luupus.

Kokkuvõtteks võib öelda, et kuigi HEp-2-suguste rakuliinide saastumine HeLa rakkudega on tekitanud vähiuuringutes muret tulemuste täpsuse ja usaldusväärsuse ning nende kliinilise asjakohasuse pärast, rõhutab Hep-2 kasulikkus antituumaalsete antikehade avastamisel ja selle kasutamine erinevates teadusdistsipliinides selle jätkuvat tähtsust. HEp-2 rakuliin on muu hulgas oluline vahend autoimmuunhaiguste diagnoosimisel ja klassifitseerimisel.

Kude
Larynks
Haigus
Adenokartsinoom
Rakendused
Reumatoloogias mängib kaudne immunofluorestsents, kasutades HEp-2 rakke, olulist rolli autoimmuunhaiguste, sealhulgas süsteemse erütematoosse luupuse ja süsteemse skleroosi diagnoosimisel
Sünonüümid
  • Hep-2
  • HEP-2
  • HEp-2/HeLa
  • Hep 2
  • Hep2
  • HEp2
  • HEP2
  • H.Ep.-2
  • H.Ep. #2
  • H.Ep. No. 2
  • Hep II
  • Human Epidermoid carcinoma #2
  • Human Epithelioma-2

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed

04Tunnused

Viide
HEp-2 (Cytioni katalooginumber 300397)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_1906

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Isoensüümid
G6PD, A
Pöördtranskriptaas
Negatiivne
Tooted
Keratiin

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytioni artikli number 820100a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS ja 1% NEAAga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1 x 104 rakku/cm2
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist asetage rakud plaadile tihedusega 5 x 104 rakku/cm2 ja laske rakkudel külmutamisprotsessist taastuda ja kinnituda vähemalt 24 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
30 aastat
Etniline kuuluvus
Afroameeriklane