NCI-H69AR

A NCI-H69AR é um derivado multirresistente da linhagem celular parental de carcinoma de pulmão de pequenas células (SCLC) NCI-H69. Ela foi desenvolvida por meio de seleção contínua em concentrações crescentes de agentes quimioterápicos, como a doxorrubicina. Como resultado, o NCI-H69AR serve como um importante sistema modelo para investigar os mecanismos de resistência adquirida a medicamentos no SCLC. Essa linhagem celular mantém muitas das características morfológicas e bioquímicas de sua linhagem parental, mas apresenta resistência profunda a vários agentes citotóxicos, tornando-a especialmente relevante para o estudo de vias de resistência mediadas por efluxo.

O principal mecanismo de resistência na NCI-H69AR envolve a superexpressão da proteína de resistência a múltiplos medicamentos P-glicoproteína (P-gp), codificada pelo gene MDR1. A P-gp funciona como uma bomba de efluxo dependente de ATP que reduz o acúmulo intracelular de fármacos, particularmente de antraciclinas, alcalóides da vinca e epipodofilotoxinas. Além disso, a NCI-H69AR apresenta expressão alterada de proteínas associadas à membrana, incluindo a anexina II, o que pode estar associado a alterações na sinalização do cálcio e no tráfego vesicular — processos implicados na resistência aos medicamentos e na resposta celular ao estresse. Essas alterações fenotípicas tornam a NCI-H69AR um modelo valioso para identificar moduladores da resistência a medicamentos e para avaliar a eficácia de agentes que têm como alvo os mecanismos de efluxo ou que contornam completamente as vias de resistência.

A NCI-H69AR também tem sido utilizada em estudos comparativos com sua linhagem parental para delinear alterações na expressão gênica e proteica, nos perfis de sensibilidade a medicamentos e na resposta a inibidores farmacológicos. Essa estrutura comparativa ajuda a esclarecer a evolução da resistência aos medicamentos no câncer e contribui para o desenvolvimento de terapias combinadas destinadas a ressensibilizar tumores resistentes. A linhagem é normalmente cultivada no meio RPMI-1640 suplementado com soro fetal bovino e mantida sob condições atmosféricas padrão. Sua robustez e seu fenótipo de resistência bem caracterizado garantiram seu lugar na pesquisa pré-clínica sobre resistência a medicamentos no câncer de pulmão.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.