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M14
Gewebe
Haut
Krankheit
Amelanotisches Melanom
Metastasenherd
Rechte Gesäßbacke, Unterhaut
Synonyme
M14-MEL, UCLA-SO-M14, UCLA SO M14, UCLA-SO-14, UCLASO-M14, Melanoma 14, M-14

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M14

Cell line · Artikelnummer 302163

The M14 cell line is a human melanoma cell line derived from a metastatic skin lesion of an adult patient with melanoma. This cell line is widely used in ...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die M14-Zelllinie ist eine humane Melanom-Zelllinie, die aus einer metastatischen Hautläsion eines erwachsenen Patienten mit Melanom stammt. Diese Zelllinie wird in der Krebsforschung häufig verwendet, insbesondere bei der Untersuchung der Melanombiologie, der Tumorprogression und der Bewertung potenzieller therapeutischer Wirkstoffe. M14-Zellen weisen typische Merkmale des malignen Melanoms auf, darunter die Fähigkeit, in immungeschwächten Mäusen Tumore zu bilden, was sie zusätzlich zu den In-vitro-Experimenten zu einem wertvollen Instrument für In-vivo-Studien macht.

Was die molekularen Merkmale betrifft, so wurde berichtet, dass M14-Zellen Mutationen in Genen tragen, die bei Melanomen häufig verändert sind, darunter das BRAF-Gen. Insbesondere weisen M14-Zellen die BRAF-V600E-Mutation auf, die zu einer konstitutiven Aktivierung des MAPK/ERK-Signalwegs führt und die Zellproliferation und das Überleben fördert. Dies macht M14 zu einem wichtigen Modell für die Untersuchung zielgerichteter Therapien, wie z. B. BRAF-Inhibitoren, die auf diese Mutation abzielen. Darüber hinaus wurden M14-Zellen aufgrund ihrer Expression verschiedener Melanom-assoziierter Antigene und ihrer Anfälligkeit für eine Modulation des Immunsystems in der Immuntherapieforschung eingesetzt.

Forscher, die die M14-Zelllinie verwenden, sollten beachten, dass sich diese Zellen nicht für therapeutische Anwendungen eignen und ausschließlich für Forschungszwecke bestimmt sind, insbesondere für solche, die sich mit der Pathophysiologie des Melanoms, dem Wirkstoffscreening und der Entwicklung neuer therapeutischer Strategien befassen. Die M14-Zelllinie bleibt eine wichtige Ressource, um unser Verständnis des Melanoms zu verbessern und neue Behandlungsmöglichkeiten zu erforschen.

Gewebe
Haut
Krankheit
Amelanotisches Melanom
Metastasenherd
Rechte Gesäßbacke, Unterhaut
Synonyme
  • M14-MEL
  • UCLA-SO-M14
  • UCLA SO M14
  • UCLA-SO-14
  • UCLASO-M14
  • Melanoma 14
  • M-14

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Fibroblastenähnlich

04Bezeichner

Quellenangabe
M14 (Cytion Katalognummer 302163)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_1395

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% hitzeinaktiviertem FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Alter des Spenders
33
Ethnische Zugehörigkeit
Europäisch