Pāriet uz saturu
M14
Audums
Āda
Slimība
Amelanotiskā melanoma
Metastāžu vieta
Labā sēžamvieta, zemādā
Sinonīmi
M14-MEL, UCLA-SO-M14, UCLA SO M14, UCLA-SO-14, UCLASO-M14, Melanoma 14, M-14

Dokumenti

M14

Cell line · Preces numurs 302163

The M14 cell line is a human melanoma cell line derived from a metastatic skin lesion of an adult patient with melanoma. This cell line is widely used in ...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

M14 šūnu līnija ir cilvēka melanomas šūnu līnija, kas iegūta no metastātiska ādas bojājuma pieaugušam pacientam ar melanomu. Šo šūnu līniju plaši izmanto vēža pētījumos, jo īpaši melanomas bioloģijas, audzēja progresēšanas un potenciālo terapeitisko līdzekļu novērtēšanā. M14 šūnām piemīt ļaundabīgajai melanomai raksturīgas īpašības, tostarp spēja veidot audzējus imūnkompromitētās pelēs, kas padara tās par vērtīgu instrumentu ne tikai in vivo pētījumiem, bet arī in vitro eksperimentiem.

Attiecībā uz molekulārajām pazīmēm ir ziņots, ka M14 šūnām ir mutācijas gēnos, kas bieži mainās melanomas gadījumā, tostarp BRAF gēnā. Konkrēti, M14 šūnās ir BRAF V600E mutācija, kas izraisa konstitīvu MAPK/ERK signalizācijas ceļa aktivāciju, veicinot šūnu proliferāciju un izdzīvošanu. Tāpēc M14 ir svarīgs modelis, lai pētītu mērķtiecīgas terapijas, piemēram, BRAF inhibitorus, kas izstrādāti, lai izmantotu šo mutāciju. Turklāt M14 šūnas ir izmantotas imūnterapijas pētījumos, jo tajās ir dažādu ar melanomu saistītu antigēnu ekspresija un tās ir jutīgas pret imūnsistēmas modulāciju.

Pētniekiem, kas izmanto M14 šūnu līniju, jāņem vērā, ka šīs šūnas nav piemērotas terapeitiskiem lietojumiem un ir paredzētas tikai pētniecības mērķiem, jo īpaši tiem, kas koncentrējas uz melanomas patofizioloģiju, zāļu skrīningu un jaunu terapeitisko stratēģiju izstrādi. M14 šūnu līnija joprojām ir galvenais resurss, lai uzlabotu mūsu izpratni par melanomu un izpētītu jaunus ārstēšanas veidus.

Audums
Āda
Slimība
Amelanotiskā melanoma
Metastāžu vieta
Labā sēžamvieta, zemādā
Sinonīmi
  • M14-MEL
  • UCLA-SO-M14
  • UCLA SO M14
  • UCLA-SO-14
  • UCLASO-M14
  • Melanoma 14
  • M-14

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Vīrietis
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Fibroblastiem līdzīgs

04Identifikatori

Atsauce
M14 (Cytion kataloga numurs 302163)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_1395

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% termiski inaktivētu FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Donora vecums
33
Etniskā piederība
Eiropas