Mine otse sisu juurde
M14
Kude
Nahk
Haigus
Amelanootiline melanoom
Metastaaside asukoht
Paremal tuharal, hüpodermis
Sünonüümid
M14-MEL, UCLA-SO-M14, UCLA SO M14, UCLA-SO-14, UCLASO-M14, Melanoma 14, M-14

Dokumendid

M14

Cell line · Toote number 302163

The M14 cell line is a human melanoma cell line derived from a metastatic skin lesion of an adult patient with melanoma. This cell line is widely used in ...

€430.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

M14 rakuliin on inimese melanoomi rakuliin, mis on saadud täiskasvanud melanoomiga patsiendi metastaatilisest nahakahjustusest. Seda rakuliini kasutatakse laialdaselt vähiuuringutes, eelkõige melanoomi bioloogia, kasvaja progresseerumise ja võimalike raviainete hindamisel. M14 rakkudel on pahaloomale iseloomulikud omadused, sealhulgas võime moodustada immuunpuudulikkusega hiirtel kasvajaid, mis teeb neist lisaks in vitro katsetele ka väärtusliku in vivo uuringu vahendi.

Molekulaarsete omaduste osas on teatatud, et M14 rakud kannavad melanoomi puhul sageli muutunud geenide, sealhulgas BRAF-geeni mutatsioone. Konkreetselt kannavad M14 rakud BRAF V600E mutatsiooni, mis põhjustab MAPK/ERK signaaliradu konstitutiivset aktiveerimist, mis soodustab rakkude proliferatsiooni ja ellujäämist. See muudab M14 rakud oluliseks mudeliks sihtotstarbeliste ravimeetodite, näiteks BRAFi inhibiitorite uurimiseks, mis on kavandatud selle mutatsiooni ärakasutamiseks. Lisaks on M14 rakke kasutatud immunoteraapia uuringutes, kuna nad ekspresseerivad erinevaid melanoomiga seotud antigeene ja on tundlikud immuunsüsteemi modulatsioonile.

M14 rakuliini kasutavad teadlased peaksid arvestama, et need rakud ei sobi terapeutiliseks kasutamiseks ja on mõeldud üksnes teadustööks, eelkõige melanoomi patofüsioloogiale, ravimite skriiningule ja uute ravistrateegiate väljatöötamisele keskenduvateks uuringuteks. M14 rakuliin on jätkuvalt oluline ressurss, et edendada meie arusaamist melanoomist ja uurida uusi ravivõimalusi.

Kude
Nahk
Haigus
Amelanootiline melanoom
Metastaaside asukoht
Paremal tuharal, hüpodermis
Sünonüümid
  • M14-MEL
  • UCLA-SO-M14
  • UCLA SO M14
  • UCLA-SO-14
  • UCLASO-M14
  • Melanoma 14
  • M-14

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Mees
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Fibroblastilaadsed

04Tunnused

Viide
M14 (Cytioni katalooginumber 302163)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_1395

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilne glutamiin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820700a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% soojusinaktiveeritud FBS-iga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

07Annetaja

Doonori vanus
33
Etniline kuuluvus
Euroopa