Mine otse sisu juurde
SiHa
Kude
Emakakael
Haigus
Inimese papilloomiviirusega seotud emakakaela lamerakk-kartsinoom
Sünonüümid
Siha, SIHA

Dokumendid

SiHa

Cell line · Toote number 305023

SiHa cells are a human cervical squamous cell carcinoma cell line that has been widely used in research for several decades. They were isolated from prima...

€430.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

SiHa rakud on inimese emakakaelavähi rakuliin, mida on teadusuuringutes laialdaselt kasutatud juba mitu aastakümmet. Need isoleeriti emaka primaarsetest biopsiafragmentidest, mis saadi 55-aastase Jaapani naissoost plaatinakartsinoomiga patsiendilt. See rakuliin pakub suurt huvi emakakaelavähki ja teisi sellega seotud haigusi uurivatele teadlastele nende ainulaadsete geneetiliste omaduste tõttu.

On leitud, et SiHa rakud ekspresseerivad p53+ ja pRB+ geene, mis osalevad rakutsükli reguleerimises, DNA parandamises ja kasvajate pärssimises. Need geenid muudavad SiHa rakud ideaalseks mudeliks vähi arengu ja progresseerumise molekulaarsete mehhanismide uurimiseks. Lisaks sellele on SiHa rakud sobivad transfektsiooni peremeheks, mis teeb neist suurepärase vahendi geeniekspressiooni uuringuteks.

SiHa rakkudel on hüpertriploidne karüotüüp, mille keskmine kromosoomide arv jääb vahemikku 69-72. SiHa rakud on HPV-16-positiivsed, näidates 1 kuni 2 koopiat viiruse genoomi integreerimist raku kohta. Rakud on kasvajalised, moodustades alasti hiirtel halvasti diferentseerunud epidermoidkartsinoomi (III aste). See teeb neist suurepärase mudeli vähi progresseerumise uurimiseks ja vähivastaste ravimite testimiseks.

SiHa rakuliin ekspresseerib erinevaid isoensüüme, sealhulgas AK-1, ES-D, G6PD, GLO-I, Me-2, PGM1 ja PGM3. Elektroonmikroskoopia näitas rohkesti toonofilamente tsütoplasmas ja desmosomeid rakkude liitekohtades. SiHa rakkude kasvuomadused on adherentsed, kahekordistumisajaga 17 tundi 10% FBS-keskkonnas ja 21 tundi 5% FBS-keskkonnas. Epiteelraku adhesioonimolekuli (EpCAM) ekspressioon on olemas 92%-l SiHa rakkudest, mis viitab nende epiteeli päritolule. Neil on tugev tsütokeratiini ekspressioon, kuid vimentiini ekspressioon puudub.

Kude
Emakakael
Haigus
Inimese papilloomiviirusega seotud emakakaela lamerakk-kartsinoom
Sünonüümid
  • Siha
  • SIHA

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Epiteel
Tuumorigeenne
Jah

04Tunnused

Viide
SiHa (Cytioni katalooginumber 305023)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_0032

05Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamiin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytioni artikli number 820100a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS ja 1% NEAAga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

07Annetaja

Doonori vanus
55 aastat
Etniline kuuluvus
Aasia