Pāriet uz saturu
SiHa
Audums
Dzemdes kakls
Slimība
Ar cilvēka papilomas vīrusu saistīta dzemdes kakla plakanšūnu karcinoma
Sinonīmi
Siha, SIHA

Dokumenti

SiHa

Cell line · Preces numurs 305023

SiHa cells are a human cervical squamous cell carcinoma cell line that has been widely used in research for several decades. They were isolated from prima...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

SiHa šūnas ir cilvēka dzemdes kakla plakanšūnu karcinomas šūnu līnija, kas jau vairākus gadu desmitus tiek plaši izmantota pētniecībā. Tās tika izolētas no primārās dzemdes biopsijas fragmentiem no 55 gadus vecas japāņu pacientes ar plakanšūnu karcinomu. Šī šūnu līnija ir ļoti interesanta pētniekiem, kas pēta dzemdes kakla vēzi un citas ar to saistītas slimības, jo tai ir unikālas ģenētiskās īpašības.

Ir konstatēts, ka SiHa šūnas ekspresē p53+ un pRB+ gēnus, kas ir iesaistīti šūnu cikla regulēšanā, DNS labošanā un audzēja nomākšanā. Šie gēni padara SiHa šūnas par ideālu modeli vēža attīstības un progresēšanas molekulāro mehānismu izpētei. Turklāt SiHa šūnas ir piemērots transfekcijas saimnieks, padarot tās par lielisku instrumentu gēnu ekspresijas pētījumiem.

SiHa šūnām ir hipertriploīds kariotips ar vidējo hromosomu skaitu no 69 līdz 72 hromosomām. SiHa šūnas ir HPV-16 pozitīvas, un tajās ir integrētas 1 līdz 2 vīrusa genoma kopijas uz šūnu. Šūnas ir tumorigēnas, veidojot vāji diferencētu epidermoīdo karcinomu (III pakāpes) nude pelēm. Tas padara tās par lielisku modeli vēža progresēšanas izpētei un pretvēža zāļu testēšanai.

SiHa šūnu līnija ekspresē dažādus izoenzīmus, tostarp AK-1, ES-D, G6PD, GLO-I, Me-2, PGM1 un PGM3. Elektronmikroskopija atklāja bagātīgus tonofilamentus citoplazmā un desmosomas šūnu savienojumos. SiHa šūnu augšanas īpašības ir adherentas, un to dubultošanās laiks ir 17 stundas 10 % FBS barotnē un 21 stunda 5 % FBS barotnē. Epitēlija šūnu adhēzijas molekulas (EpCAM) ekspresija ir 92 % SiHa šūnu, kas norāda uz to epitēlija izcelsmi. Tām ir izteikta citokeratīna ekspresija, bet nav vimentīna ekspresijas.

Audums
Dzemdes kakls
Slimība
Ar cilvēka papilomas vīrusu saistīta dzemdes kakla plakanšūnu karcinoma
Sinonīmi
  • Siha
  • SIHA

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlija
Tumorogēns
Jā

04Identifikatori

Atsauce
SiHa (Cytion kataloga numurs 305023)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_0032

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS un 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Donora vecums
55 gadi
Etniskā piederība
Āzijas