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L929-GFP
Tessuto
Tessuto connettivo
Sinonimi
L929/GL50

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L929-GFP

Cell line · Codice prodotto 305956

Le cellule L-929-GFP sono un derivato marcato con fluorescenza della linea cellulare murina di fibroblasti L-929, originariamente ottenuta da tessuto connettivo sottocutaneo...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule L-929-GFP sono un derivato marcato con fluorescenza della linea cellulare murina di fibroblasti L-929, originariamente ottenuta dal tessuto connettivo sottocutaneo di un topo adulto. La linea parentale L-929 è uno dei modelli di fibroblasti murini più ampiamente utilizzati nella ricerca biomedica ed è caratterizzata da crescita aderente, morfologia fusiforme e robusta capacità proliferativa. Le cellule L-929 sono ampiamente utilizzate negli studi sulla citotossicità, l’infiammazione, la biologia della matrice extracellulare e le interazioni ospite-patogeno, e sono comunemente impiegate anche per la produzione e il bioanalisi di citochine come il fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-α).

L’espressione stabile della proteina fluorescente verde (GFP) nelle cellule L-929-GFP consente la visualizzazione diretta e il monitoraggio quantitativo del comportamento dei fibroblasti in tempo reale. Queste cellule sono particolarmente utili per applicazioni basate sulla fluorescenza, tra cui saggi di migrazione, esperimenti di cocultura, studi di ingegneria tissutale e imaging di cellule vive. Le cellule L-929-GFP conservano le caratteristiche biologiche fondamentali della linea di fibroblasti parentale, offrendo al contempo una maggiore utilità per il monitoraggio della localizzazione cellulare, della proliferazione e delle interazioni all’interno di ambienti cellulari complessi. Di conseguenza, fungono da modello versatile per lo studio delle dinamiche delle cellule stromali, dei processi di guarigione delle ferite, della compatibilità dei biomateriali e delle risposte citotossiche immuno-mediate.

Modifica genetica: modificate in modo stabile tramite trasduzione lentivirale a replicazione incompetente per esprimere il reporter della proteina fluorescente verde ZsGreen1; mantenute come popolazione policlonale sotto selezione con puromicina (1–5 µg/mL). Contenimento S1/BSL-1.

Tessuto
Tessuto connettivo
Sinonimi
  • L929/GL50

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This cell line contains a stably integrated ZsGreen1 green fluorescent protein reporter introduced via replication-incompetent lentiviral transduction. The resulting polyclonal cell population was maintained under puromycin selection (1–5 µg/mL). S1 containment is required. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Tipo di cellula
Fibroblasti

04Identificatori

Riferimento bibliografico
L929-GFP (codice catalogo Cytion 305956)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_E2Z7

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
ZsGreen1 (proteina fluorescente verde)

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Da 1 a 3 x 104 cellule/cm2
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Controllo di qualità e crioconservazione

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo + 10% DMSO per ottenere un'adeguata vitalità post-scongelamento.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
100 giorni