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L929-GFP
Tecido
Tecido conjuntivo
Sinónimos
L929/GL50

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L929-GFP

Cell line · Número do produto 305956

As células L-929-GFP são um derivado marcado com fluorescência da linha celular de fibroblastos murinos L-929, que foi originalmente estabelecida a partir de tecido conjuntivo subcutâneo...

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01Informações gerais

Descrição

As células L-929-GFP são um derivado marcado com fluorescência da linha celular de fibroblastos murinos L-929, que foi originalmente estabelecida a partir do tecido conjuntivo subcutâneo de um rato adulto. A linha parental L-929 é um dos modelos de fibroblastos de ratinho mais amplamente utilizados na investigação biomédica e caracteriza-se pelo seu crescimento aderente, morfologia fusiforme e capacidade proliferativa robusta. As células L-929 são amplamente utilizadas em estudos de citotoxicidade, inflamação, biologia da matriz extracelular e interações hospedeiro-patógeno, sendo também frequentemente empregadas na produção e bioensaio de citocinas, tais como o fator de necrose tumoral-α (TNF-α).

A expressão estável da proteína fluorescente verde (GFP) nas células L-929-GFP permite a visualização direta e o acompanhamento quantitativo do comportamento dos fibroblastos em tempo real. Estas células são particularmente úteis para aplicações baseadas em fluorescência, incluindo ensaios de migração, experiências de cocultura, estudos de engenharia de tecidos e imagiologia de células vivas. As células L-929-GFP mantêm as características biológicas essenciais da linha parental de fibroblastos, ao mesmo tempo que proporcionam uma utilidade reforçada para monitorizar a localização celular, a proliferação e as interações em ambientes celulares complexos. Consequentemente, servem como um modelo versátil para investigar a dinâmica das células estromais, os processos de cicatrização de feridas, a compatibilidade de biomateriais e as respostas citotóxicas mediadas pelo sistema imunitário.

Modificação genética: Modificadas de forma estável por transdução lentiviral incompetente para replicação, de modo a expressarem o repórter da proteína fluorescente verde ZsGreen1; mantidas como uma população policlonal sob seleção com puromicina (1–5 µg/mL). Nível de contenção S1/BSL-1.

Tecido
Tecido conjuntivo
Sinónimos
  • L929/GL50

02Classificação

Organismo
Rato
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This cell line contains a stably integrated ZsGreen1 green fluorescent protein reporter introduced via replication-incompetent lentiviral transduction. The resulting polyclonal cell population was maintained under puromycin selection (1–5 µg/mL). S1 containment is required. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Tipo de célula
Fibroblastos

04Identificadores

Referência
L929-GFP (número de catálogo da Cytion 305956)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_E2Z7

05Expressão e suscetibilidade

Expressão do antígeno
ZsGreen1 (proteína fluorescente verde)

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM:Ham's F12 (1:1), com: 3,1 g/L de glucose, com: 2,5 mM de L-Glutamina, com: 15 mM de HEPES, com: 0,5 mM de piruvato de sódio, com: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820400a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 a 3 x 104 células/cm2
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Controlo de qualidade e criopreservação

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo + 10% de DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
100 dias