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CCK-81
Tecido
Metastático
Doença
Adenocarcinoma do cólon
Local da metástase
Nódulo linfático
Sinónimos
CCK81

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CCK-81

Cell line · Número do produto 305757

The CCK-81 cell line is a human colorectal adenocarcinoma model derived from a primary tumor. It is commonly used in cancer biology studies focusing on ga...

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Personalização / Recomendações

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Lote
Recomendado (lote mais recente)
  • CoA
1

01Informações gerais

Descrição

A linha celular CCK-81 é um modelo de adenocarcinoma colorretal humano derivado de um tumor primário. É frequentemente utilizada em estudos de biologia do cancro centrados em neoplasias malignas do trato gastrointestinal e foi caracterizada no que diz respeito a várias alterações genéticas e perfis de resposta a fármacos. De acordo com o rastreio funcional de genes supressores de tumores, a CCK-81 expressa o **TP53** mutante, conforme confirmado por ensaios funcionais baseados em leveduras, com apenas cerca de 6% das colónias a apresentarem o fenótipo p53 transcripcionalmente ativo, indicando uma mutação com perda de função. Este estado de mutação está em consonância com a sua origem tumorigénica e contribui para a sua relevância como modelo para o estudo de cancros colorretais com deficiência de p53.

A CCK-81 também foi incluída em importantes compêndios de linhas celulares cancerígenas, como a Cancer Cell Line Encyclopedia (CCLE), onde foi caracterizada em várias camadas ómicas, incluindo expressão genética, variação do número de cópias, estado de mutação e sensibilidade aos fármacos. A sua inclusão nestes conjuntos de dados permite análises integradas das dependências das vias e vulnerabilidades terapêuticas em todos os subtipos de cancro colorretal. Por exemplo, o perfil proteogenómico destacou que as linhas celulares de cancro colorretal, incluindo a CCK-81, apresentam frequentemente vias de sinalização desreguladas, tais como Wnt/β-catenina e MAPK, tornando-as adequadas para estudos de oncologia de precisão que visem estes eixos.

Tecido
Metastático
Doença
Adenocarcinoma do cólon
Local da metástase
Nódulo linfático
Sinónimos
  • CCK81

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Tempo de duplicação
45 horas

04Identificadores

Referência
CCK-81 (número de catálogo da Cytion 305757)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_2873

05Expressão e suscetibilidade

Perfil mutacional
Mutação: FBXW7, simples, p.Arg465Cys (c.1393C>T), heterozigótica (DepMap=ACH-000963).Mutação, PIK3CA, Simples, p.Cys420Arg (c.1258T>C), Heterozigótica (DepMap=ACH-000963). Mutação, TP53, Simples, p.Pro278His (c.833C>A), Heterozigótica

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
EMEM (MEM Eagle), com: 2 mM L-Glutamina, com: 2,2 g/L NaHCO3, com: EBSS (número de artigo Cytion 820100a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Adicione ao meio 10 % de FBS, 1 % de NEAA e 1 mM de piruvato de sódio
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 a 3 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
62 anos
Etnia
Japonês