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- Tissue
- Poumon
- Disease
- Carcinome pulmonaire à petites cellules
- Metastatic site
- Épanchement pleural
- Synonyms
- NCI-H446, H-446, NCI-446, NCIH446
Documents
NCI-H446
Cell line · Product number 305049
This cell line was established in 1982 by D. Carney, A.F. Gazdar and associates from the pleural fluid of a patient with small cell cancer of the lung. The o...
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01General information
- Description
- Cette lignée cellulaire a été établie en 1982 par D. Carney, A.F. Gazdar et leurs collaborateurs à partir du liquide pleural d’un patient atteint d’un cancer du poumon à petites cellules. La morphologie initiale de la tumeur n’était pas caractéristique d’un cancer du poumon à petites cellules. Sur le plan biochimique et morphologique, cette lignée cellulaire constitue une variante du cancer du poumon à petites cellules; elle exprime l’énolase spécifique des neurones ainsi que l’isoenzyme cérébrale de la créatine kinase. Aucune trace de décarboxylase de la L-DOPA, de bombésine, de vasopressine, d’ocytocine ou de peptide libérant la gastrine n’a été détectée dans cette lignée cellulaire. Cette lignée cellulaire présente un degré d’amplification de l’ADN de c-myc 20 fois plus élevé et un degré d’ARN de c-myc 15 fois plus élevé. La lignée cellulaire a été initialement cultivée dans un milieu RPMI 1640 sans sérum, enrichi de 10 nM d’hydrocortisone, de 5 microgrammes/mL d’insuline, de 10 microgrammes/mL de transferrine, de 10 nM de 17-bêta-estradiol, et 30 nM de sélénite de sodium. Ces cellules permettent de former des tumeurs transplantables présentant une histologie atypique de cancer du poumon à petites cellules.
- Tissue
- Poumon
- Disease
- Carcinome pulmonaire à petites cellules
- Metastatic site
- Épanchement pleural
- Synonyms
- NCI-H446
- H-446
- NCI-446
- NCIH446
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- De type épithélial
- Tumourigenic
- Oui, chez les souris nues (les cellules forment des tumeurs transplantables présentant une histologie atypique de la tumeur pulmonaire à petites cellules).
04Identifiers
- Citation
- NCI-H446 (numéro de catalogue Cytion 305049)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_1562
05Handling and culture
- Culture medium
- RPMI 1640, contenant 2,0 mM de glutamine stable et 2,0 g/L de NaHCO₃ (numéro d'article Cytion 820700a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5 % de CO₂, atmosphère humidifiée.
- Supplements
- Ajouter au milieu 10 % de FBS, 2,5 g/L de glucose, 10 mM d’HEPES et 1,0 mM de pyruvate de sodium
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- Recueillez les cellules en suspension dans un tube de 15 ml et lavez délicatement les cellules adhérentes avec du PBS sans calcium ni magnésium (utilisez 3 à 5 ml pour les flacons T25 et 5 à 10 ml pour les flacons T75). Appliquez de l’Accutase (1 à 2 ml pour les flacons T25, 2,5 ml pour les flacons T75) en veillant à bien recouvrir toute la couche cellulaire. Laissez les cellules incuber à température ambiante pendant 10 minutes. Après l’incubation, combinez la suspension et les cellules adhérentes, puis centrifugez le tout. Après la centrifugation, remettez soigneusement le culot cellulaire en suspension et transférez la suspension cellulaire dans de nouveaux flacons contenant du milieu frais.
- Fluid renewal
- 2 à 3 fois par semaine
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
06Quality control and cryopreservation
- Sterility
La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes par luminescence.
Afin de s’assurer qu’il n’y a aucune contamination bactérienne, fongique ou par des levures, les cultures cellulaires font l’objet d’inspections visuelles quotidiennes.
- Freeze medium
- Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (contenant du sérum fœtal bovin) + 10 % de DMSO pour assurer une viabilité adéquate après décongélation, ou du CM-1 (référence Cytion 800100), qui contient des osmoprotecteurs et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryoconservation.
- Storage conditions
Pour une conservation à long terme, placez les flacons dans de l’azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre environ −150 et −196 °C. L’entreposage à −80 °C n’est acceptable qu’à titre d’étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l’azote liquide.
- Shipping conditions
Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées dans de la glace sèche, dans un emballage isotherme validé contenant suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d’environ −78 °C pendant tout le transport. À la réception, inspectez immédiatement le conteneur et transférez sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.
07Donor
- Donor age
- 61 ans
- Ethnicity
- européen
08Legal and safety
- Safety precautions
- Lorsqu’on prévoit entreposer un cryotube dans de l’azote liquide en vue d’une décongélation ultérieure, il est impératif de respecter des mesures de sécurité rigoureuses. Le port de gants et de vêtements de protection appropriés est essentiel, et l’utilisation d’un masque facial ou de lunettes de protection est obligatoire lors du transfert d’échantillons congelés vers ou depuis le réservoir d’azote liquide. Cette précaution vise à réduire le risque de blessure causé par d’éventuelles explosions de cryotubes lors de leur retrait, pouvant entraîner la projection de fragments coupants.
- Warranty
Chez Cytion, nous garantissons la qualité et la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours à compter de leur expédition depuis nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d’analyse et/ou la fiche technique du produit.
Pour plus de détails, veuillez consulter notre déclaration de garantie.
- Material Transfer Agreement required
- Yes
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