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- Tissue
- Pulmão
- Disease
- Carcinoma de pequenas células do pulmão
- Metastatic site
- Derrame pleural
- Synonyms
- NCI-H446, H-446, NCI-446, NCIH446
Documents
NCI-H446
Cell line · Product number 305049
This cell line was established in 1982 by D. Carney, A.F. Gazdar and associates from the pleural fluid of a patient with small cell cancer of the lung. The o...
Recommended (freshest lot)
01General information
- Description
- Essa linhagem celular foi estabelecida em 1982 por D. Carney, A.F. Gazdar e colaboradores a partir do líquido pleural de um paciente com câncer de pulmão de pequenas células. A morfologia original do tumor não era característica do câncer de pulmão de pequenas células. A linhagem celular é uma variante do câncer de pulmão de pequenas células em termos de bioquímica e morfologia, e expressa a enolase específica de neurônios, bem como a isoenzima cerebral da creatina quinase. Não foi detectada na linha celular a presença de L-DOPA descarboxilase, bombesina, vasopressina, oxitocina ou peptídeo liberador de gastrina. Essa linha celular apresenta um grau 20 vezes maior de amplificação do DNA do c-myc e um grau 15 vezes maior de RNA do c-myc. A linhagem celular foi originalmente propagada em meio RPMI 1640 sem soro, suplementado com 10 nM de hidrocortisona, 5 microgramas/mL de insulina, 10 microgramas/mL de transferrina, 10 nM de 17-beta-estradiol, e 30 nM de selenito de sódio. Essas células podem formar tumores transplantáveis com histologia atípica de câncer de pulmão de pequenas células.
- Tissue
- Pulmão
- Disease
- Carcinoma de pequenas células do pulmão
- Metastatic site
- Derrame pleural
- Synonyms
- NCI-H446
- H-446
- NCI-446
- NCIH446
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- De tipo epitelial
- Tumourigenic
- Sim, em camundongos nude (as células formam tumores transplantáveis com histologia atípica de SCLC).
04Identifiers
- Citation
- NCI-H446 (número de catálogo da Cytion 305049)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_1562
05Handling and culture
- Culture medium
- RPMI 1640, com 2,0 mM de glutamina estável e 2,0 g/L de NaHCO₃ (número de artigo da Cytion: 820700a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.
- Supplements
- Adicione ao meio 10% de FBS, 2,5 g/L de glicose, 10 mM de HEPES e 1,0 mM de piruvato de sódio
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- Recolha as células em suspensão em um tubo de 15 ml e lave delicadamente as células aderentes com PBS sem cálcio e magnésio (use 3 a 5 ml para frascos T25 e 5 a 10 ml para frascos T75). Aplique Accutase (1 a 2 ml para frascos T25, 2,5 ml para frascos T75), garantindo a cobertura total da camada celular. Deixe as células incubarem à temperatura ambiente por 10 minutos. Após a incubação, combine e centrifugue tanto a suspensão quanto as células aderentes. Após a centrifugação, ressuspenda cuidadosamente o sedimento celular e transfira a suspensão celular para novos frascos contendo meio fresco.
- Fluid renewal
- 2 a 3 vezes por semana
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
06Quality control and cryopreservation
- Sterility
A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.
Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.
- Freeze medium
- Como meio de criopreservação, utilizamos meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% de DMSO para garantir viabilidade adequada após o descongelamento, ou CM-1 (número de catálogo da Cytion 800100), que inclui osmoprotetores e estabilizadores metabólicos otimizados para melhorar a recuperação e reduzir o estresse induzido pela criopreservação.
- Storage conditions
Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.
- Shipping conditions
As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.
07Donor
- Donor age
- 61 anos
- Ethnicity
- Europeu
08Legal and safety
- Safety precautions
- Ao planejar o armazenamento de um criotubo em nitrogênio líquido para descongelamento futuro, é obrigatório seguir medidas de segurança rigorosas. É essencial o uso de luvas e roupas de proteção adequadas, além do uso obrigatório de máscara facial ou óculos de proteção durante a transferência de amostras congeladas para dentro ou para fora do tanque de nitrogênio líquido. Isso visa mitigar o risco de ferimentos decorrentes de possíveis explosões dos criotubos durante a remoção, o que pode resultar na projeção de fragmentos pontiagudos.
- Warranty
Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.
Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.
- Material Transfer Agreement required
- Yes
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