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- Tissue
- Pulmón
- Disease
- Carcinoma pulmonar de células pequeñas
- Metastatic site
- Derrame pleural
- Synonyms
- NCI-H446, H-446, NCI-446, NCIH446
Documents
NCI-H446
Cell line · Product number 305049
This cell line was established in 1982 by D. Carney, A.F. Gazdar and associates from the pleural fluid of a patient with small cell cancer of the lung. The o...
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01General information
- Description
- Esta línea celular fue establecida en 1982 por D. Carney, A.F. Gazdar y sus colaboradores a partir del líquido pleural de un paciente con cáncer de pulmón de células pequeñas. La morfología original del tumor no era característica del cáncer de pulmón de células pequeñas. La línea celular es una variante del cáncer de pulmón de células pequeñas en cuanto a bioquímica y morfología, y expresa enolasa específica de neuronas, así como la isoenzima cerebral de la creatina quinasa. No se ha detectado en esta línea celular ni L-DOPA descarboxilasa, ni bombesina, ni vasopresina, ni oxitocina, ni péptido liberador de gastrina. Esta línea celular presenta un grado 20 veces mayor de amplificación del ADN de c-myc y un grado 15 veces mayor de ARN de c-myc. La línea celular se propagó originalmente en medio RPMI 1640 sin suero, suplementado con 10 nM de hidrocortisona, 5 microgramos/mL de insulina, 10 microgramos/mL de transferrina, 10 nM de 17-beta-estradiol, y 30 nM de selenito de sodio. Estas células pueden formar tumores trasplantables con histología atípica de cáncer de pulmón de células pequeñas.
- Tissue
- Pulmón
- Disease
- Carcinoma pulmonar de células pequeñas
- Metastatic site
- Derrame pleural
- Synonyms
- NCI-H446
- H-446
- NCI-446
- NCIH446
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- De tipo epitelial
- Tumourigenic
- Sí, en ratones nude (las células forman tumores trasplantables con una histología atípica de SCLC).
04Identifiers
- Citation
- NCI-H446 (número de catálogo de Cytion 305049)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_1562
05Handling and culture
- Culture medium
- RPMI 1640, con 2,0 mM de glutamina estable y 2,0 g/L de NaHCO₃ (número de artículo de Cytion: 820700a)
- Incubation atmosphere
37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.
- Supplements
- Añada al medio un 10 % de FBS, 2,5 g/L de glucosa, 10 mM de HEPES y 1,0 mM de piruvato de sodio
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- Recoja las células en suspensión en un tubo de 15 ml y lave suavemente las células adherentes con PBS sin calcio ni magnesio (utilice de 3 a 5 ml para frascos T25 y de 5 a 10 ml para frascos T75). Aplique Accutase (1 a 2 ml para frascos T25, 2,5 ml para frascos T75) asegurándose de cubrir completamente la capa celular. Deje que las células se incuben a temperatura ambiente durante 10 minutos. Tras la incubación, combine y centrifugue tanto la suspensión como las células adheridas. Después de la centrifugación, resuspender cuidadosamente el sedimento celular y transferir la suspensión celular a nuevos frascos que contengan medio fresco.
- Fluid renewal
- De 2 a 3 veces por semana
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
06Quality control and cryopreservation
- Sterility
Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.
Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.
- Freeze medium
- Como medio de criopreservación, utilizamos un medio de crecimiento completo (que incluye FBS) + 10 % de DMSO para garantizar una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo de Cytion 800100), que incluye osmoprotectores y estabilizadores metabólicos optimizados para mejorar la recuperación y reducir el estrés inducido por la criopreservación.
- Storage conditions
Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.
- Shipping conditions
Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.
07Donor
- Donor age
- 61 años
- Ethnicity
- Europeo
08Legal and safety
- Safety precautions
- Cuando se planea almacenar un criovial en nitrógeno líquido para su descongelación futura, es obligatorio cumplir con estrictas medidas de seguridad. Es esencial contar con guantes y ropa de protección adecuados, y se requiere el uso de una mascarilla o lentes de seguridad durante la transferencia de muestras congeladas hacia o desde el tanque de nitrógeno líquido. Esto tiene como objetivo mitigar el riesgo de lesiones por posibles explosiones de los criotubos al retirarlos, lo que puede provocar la proyección de fragmentos afilados.
- Warranty
En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.
Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.
- Material Transfer Agreement required
- Yes
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