Pāriet uz saturu
NCI-H446
Audums
Plaušas
Slimība
Plaušu sīkšūnu karcinoma
Metastāžu vieta
Pleiras efūzija
Sinonīmi
NCI-H446, H-446, NCI-446, NCIH446

Dokumenti

NCI-H446

Cell line · Preces numurs 305049

This cell line was established in 1982 by D. Carney, A.F. Gazdar and associates from the pleural fluid of a patient with small cell cancer of the lung. The o...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts
Šo šūnu līniju 1982. gadā izveidoja D. Carney, A.F. Gazdar un līdzstrādnieki no pleiras šķidruma, kas iegūts no pacienta ar plaušu sīkšūnu vēzi. Sākotnējā audzēja morfoloģija nebija raksturīga sīkšūnu plaušu vēzim. Šūnu līnija pēc bioķīmijas un morfoloģijas ir sīkšūnu plaušu vēža variants, un tā ekspresē neironiem specifisko enolāzi, kā arī smadzeņu kreatīnkināzes izoenzīmu. Šūnu līnijā nav konstatēta L-DOPA dekarboksilāzes, bombezīna, vazopresīna, oksitocīna vai gastrīnu atbrīvojošā peptīda klātbūtne. Šai šūnu līnijai ir 20 reižu augstāka c-myc DNS amplifikācijas pakāpe un 15 reižu augstāka c-myc RNS amplifikācijas pakāpe. Šūnu līnija sākotnēji tika pavairota RPMI 1640 barotnē bez seruma, kas papildināta ar 10 nM hidrokortizona, 5 mikrogramiem/ml insulīna, 10 mikrogramiem/ml transferīna, 10 nM 17-beta estradiola un 30 nM nātrija selenīta. Šūnas var veidot transplantējamus audzējus ar netipiska sīkšūnu plaušu vēža histoloģiju.
Audums
Plaušas
Slimība
Plaušu sīkšūnu karcinoma
Metastāžu vieta
Pleiras efūzija
Sinonīmi
  • NCI-H446
  • H-446
  • NCI-446
  • NCIH446

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Vīrietis
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Tumorogēns
Jā, kailām pelēm (šūnas veido transplantējamus audzējus ar netipisku SCLC histoloģiju).

04Identifikatori

Atsauce
NCI-H446 (Cytion kataloga numurs 305049)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_1562

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildiniet barotni ar 10% FBS, pievienojiet 2,5 g/l glikozes, 10 mM HEPES un 1,0 mM nātrija piruvāta
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Savāc suspensijas šūnas 15 ml mēģenē un saudzīgi izmazgā pielipušās šūnas ar PBS bez kalcija un magnija (T25 kolbām izmanto 3-5 ml, bet T75 kolbām - 5-10 ml). Uzklājiet Accutase (1-2 ml T25 kolbām, 2,5 ml T75 kolbām), nodrošinot pilnīgu šūnu slāņa pārklājumu. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 10 minūtes. Pēc inkubācijas apvienot un centrifugēt gan suspensiju, gan pielipušās šūnas. Pēc centrifugēšanas uzmanīgi resuspendēt šūnu granulas un pārvietot šūnu suspensiju jaunās kolbās ar svaigu barotni.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Donora vecums
61 gads
Etniskā piederība
Eiropas