Przejdź do treści
NCI-H446
Chusteczka
Płuco
Choroba
Rak drobnokomórkowy płuca
Miejsce przerzutów
Wysięk opłucnowy
Synonimy
NCI-H446, H-446, NCI-446, NCIH446

Dokumenty

NCI-H446

Cell line · Numer produktu 305049

This cell line was established in 1982 by D. Carney, A.F. Gazdar and associates from the pleural fluid of a patient with small cell cancer of the lung. The o...

€430.00bez podatku i kosztów wysyłki
W magazynie
Lot
Polecane (najświeższa partia)
  • CoA
1

01Informacje ogólne

Opis
Ta linia komórkowa została utworzona w 1982 roku przez D. Carneya, A.F. Gazdara i współpracowników z płynu opłucnowego pacjenta z drobnokomórkowym rakiem płuca. Pierwotna morfologia guza nie była charakterystyczna dla drobnokomórkowego raka płuc. Linia komórkowa jest wariantem drobnokomórkowego raka płuca pod względem biochemicznym i morfologicznym oraz wykazuje ekspresję enolazy swoistej dla neuronów, jak również izoenzymu mózgowej kinazy kreatynowej. W linii komórkowej nie wykryto dekarboksylazy L-DOPA, bombezyny, wazopresyny, oksytocyny ani peptydu uwalniającego gastrynę. Ta linia komórkowa wykazuje 20-krotnie wyższy stopień amplifikacji DNA c-myc i 15-krotnie wyższy stopień c-myc RNA. Linia komórkowa była pierwotnie rozmnażana w wolnej od surowicy pożywce RPMI 1640 z dodatkiem 10 nM hydrokortyzonu, 5 mikrogramów/ml insuliny, 10 mikrogramów/ml transferyny, 10 nM 17-beta-estradiolu i 30 nM seleninu sodu. Komórki mogą tworzyć guzy do przeszczepu o nietypowej histologii drobnokomórkowego raka płuc.
Chusteczka
Płuco
Choroba
Rak drobnokomórkowy płuca
Miejsce przerzutów
Wysięk opłucnowy
Synonimy
  • NCI-H446
  • H-446
  • NCI-446
  • NCIH446

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Mężczyzna
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Podobny do nabłonka
Nowotworotwórczy
Tak, u nagich myszy (komórki tworzą guzy do przeszczepu o nietypowej histologii SCLC).

04Identyfikatory

Źródło
NCI-H446 (numer katalogowy Cytion 305049)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1562

05Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabilnej glutaminy, w: 2,0 g/L NaHCO3 (numer artykułu Cytion 820700a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić pożywkę 10% FBS, dodać 2,5 g/l glukozy, 10 mM HEPES i 1,0 mM pirogronianu sodu
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase
Hodowla komórek w subkulturze
Zebrać komórki zawiesiny do probówki o pojemności 15 ml i delikatnie przemyć przylegające komórki PBS pozbawionym wapnia i magnezu (użyć 3-5 ml dla kolb T25 i 5-10 ml dla kolb T75). Nałożyć Accutase (1-2 ml na kolby T25, 2,5 ml na kolby T75), zapewniając pełne pokrycie warstwy komórek. Pozostawić komórki do inkubacji w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Po inkubacji połączyć i odwirować zarówno zawiesinę, jak i przylegające komórki. Po odwirowaniu ostrożnie zawiesić osad komórek i przenieść zawiesinę komórek do nowych kolb zawierających świeżą pożywkę.
Odnawianie płynów
2 do 3 razy w tygodniu
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

07Darczyńca

Wiek dawcy
61 lat
Pochodzenie etniczne
Europejski