Introducción

El Células 3T6-Swiss albino, también conocida como Swiss 3T6, NIH 3T6, 3T6 y GM05862, representa una de las líneas celulares de fibroblastos de ratón inmortalizadas espontáneamente más duraderas en la investigación biomédica. Establecida en 1963 por Todaro y Green a partir de embriones de ratón suizos desagregados, esta línea fue una de las primeras en demostrar que las células embrionarias primarias de ratón podían sufrir inmortalización espontánea bajo condiciones de pases definidas [1]. A lo largo de las décadas siguientes, los investigadores han utilizado las células albinas 3T6-Swiss en una gama extraordinariamente amplia de disciplinas, entre ellas la virología, la reparación del ADN, el metabolismo de los nucleótidos, la biología de los receptores y la evaluación de biomateriales. El rápido tiempo de duplicación de la línea celular, sus sólidas características de crecimiento y su morfología fibroblástica la convierten en un modelo fácil de manejar experimentalmente. Su respuesta bien caracterizada a los factores de crecimiento y a los mitógenos también la ha convertido en una herramienta preferida para estudiar la transducción de señales y la regulación del ciclo celular en contextos de fibroblastos no transformados frente a los transformados espontáneamente.

Puntos clave

• La 3T6-Swiss albino es una línea celular de fibroblastos de ratón inmortalizada espontáneamente, establecida en 1963 a partir de embriones de ratón suizo por Todaro y Green.
• La línea celular tiene el número de acceso CVCL_0601 de Cellosaurus y presenta un tiempo de duplicación excepcionalmente rápido, de aproximadamente 15 horas.
• La designación «3T6» indica el régimen de cultivo utilizado para obtenerla: trasplante cada 3 días con un inóculo de 6 × 10⁵ células por placa.
• Se ha utilizado ampliamente en estudios de virología, especialmente en la investigación sobre la transcripción, la replicación y las proteínas de la cápside de los poliomavirus.
• Esta línea sirve como un modelo sólido para investigar los mecanismos de reparación del ADN, la señalización de los factores de crecimiento y la biosíntesis de nucleótidos.
• Las células albinas suizas 3T6 son susceptibles a la infección bacteriana intracelular, lo que las hace útiles para estudios sobre la interacción entre el huésped y el patógeno.
• Esta línea ha sido validada para ensayos de biocompatibilidad y citotoxicidad en la investigación sobre biomateriales y la cicatrización de heridas.

¿Qué es el 3T6-Swiss albino?

La línea 3T6-Swiss albino (CVCL_0601) se obtuvo a partir de tejido embrionario completo de ratones Swiss albino; Cellosaurus registra el sexo de la línea como masculino. Los cultivos fundadores se prepararon triturando embriones de ratón suizo de entre 17 y 19 días de edad agrupados, por lo que la línea no se remonta a un solo animal donante identificado [1]. La línea celular se estableció mediante el emblemático protocolo 3T ideado por Todaro y Green, en el que se realizaron pases seriados de células embrionarias primarias de ratón a intervalos fijos y con densidades de inoculación determinadas hasta que se produjo la inmortalización espontánea. La nomenclatura refleja directamente ese régimen: «3T» denota la transferencia a intervalos de tres días, y el segundo número denota el inóculo en unidades de 10⁵ células por placa. Por lo tanto, la línea 3T6 se mantuvo a 6 × 10⁵ células por placa, junto con las líneas hermanas 3T3 (3 × 10⁵) y 3T12 (12 × 10⁵) descrito en el mismo estudio [1].

Las condiciones de cultivo utilizadas durante el establecimiento determinaron el fenotipo resultante. Mientras que la línea 3T3 se mantuvo deliberadamente a baja densidad y nunca se le permitió alcanzar la confluencia —lo que dio lugar a una línea con una inhibición por contacto muy marcada—, las líneas mantenidas a densidades más altas perdieron progresivamente la inhibición por contacto, formaron multicapas y alcanzaron densidades de saturación mucho más altas [1]. Por lo tanto, los bancos de células describen a la línea 3T6 como no inhibida por contacto, en claro contraste con la línea 3T3. Al igual que todas las líneas de ratón establecidas en ese estudio, la 3T6 también pasó de un cariotipo diploide a uno heteroploide durante su establecimiento, situándose en el rango hipotetraploide; los repositorios informan de un cariotipo inestable con una línea madre de 78 a 81 cromosomas. La línea produce colágeno y ácido hialurónico, conservando ciertas características del tejido conectivo que reflejan su origen fibroblástico. La identidad de la especie se ha confirmado mediante secuenciación de alto rendimiento dirigida al gen de la subunidad 1 de la citocromo c oxidasa (COX1), lo que proporciona una autenticación molecular independiente del origen murino [2].

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Ventajas de las células albinas 3T6-Swiss

Una de las ventajas más prácticas de las células albinas 3T6-Swiss es su rápida tasa de proliferación. Todaro y Green documentaron cómo el tiempo de generación de la línea 3T6 emergente se redujo de 29 horas a 15 horas a lo largo de ocho trasplantes sucesivos después de que la población se hubiera vuelto completamente heteroploide, registrándose valores inferiores a 14 horas en la misma línea [1]. Por lo tanto, los bancos de células indican un tiempo de duplicación de aproximadamente 15 horas. Esto permite llevar a cabo flujos de trabajo experimentales de alto rendimiento y reduce el tiempo necesario para generar el número suficiente de células para los ensayos, mientras que el patrón de crecimiento en monocapa adherente facilita la observación y la manipulación microscópicas.

La amplia versatilidad experimental de las células albinas 3T6-Swiss constituye una segunda ventaja importante. Esta línea permite la transfección estable y transitoria con una amplia gama de constructos de expresión, se ha utilizado para propagar poliomavirus de manera productiva y responde de manera confiable a estímulos extracelulares, tales como factores de crecimiento y agonistas purinérgicos. Esta versatilidad significa que una sola línea celular puede satisfacer múltiples necesidades experimentales dentro de un mismo laboratorio, lo que reduce la carga que implica mantener numerosas cepas celulares distintas. Además, la línea ha demostrado su utilidad en un amplio espectro de disciplinas —desde la virología molecular hasta las pruebas de biomateriales—, lo que subraya su amplia aplicabilidad.

Limitaciones de las células 3T6-Swiss albino

Al tratarse de una línea inmortalizada espontáneamente que perdió la inhibición por contacto durante su establecimiento, las células albinas 3T6-Swiss alcanzan densidades de saturación mucho más altas que los fibroblastos normales y no presentan la detención del crecimiento dependiente de la densidad que se observa en los cultivos con inhibición por contacto. [1]. Por lo tanto, no reproducen las respuestas de inhibición por contacto que se observan en líneas como la 3T3, lo cual puede ser un factor crítico a tener en cuenta al diseñar experimentos destinados a reproducir la fisiología normal de los tejidos. Los investigadores que estudien la supresión tumoral, el control del crecimiento dependiente del anclaje o las respuestas normales de cicatrización de heridas deben actuar con precaución al interpretar los resultados de esta línea. El cariotipo constituye una limitación relacionada: la línea 3T6 es heteroploide en lugar de diploide, con un complemento cromosómico inestable en el rango hipotetraploide, por lo que no es un fondo adecuado para trabajos que requieran un genoma euploide.

Otra limitación se relaciona con la naturaleza murina, embrionaria y fibroblástica del modelo. Es posible que los hallazgos obtenidos en células 3T6-Swiss albinas no se puedan aplicar directamente a la biología celular humana ni a tipos de células diferenciadas. Al igual que con todas las líneas celulares continuas, la deriva genómica a lo largo de un gran número de pases puede introducir variabilidad fenotípica. Por lo tanto, se recomienda realizar autenticaciones periódicas para confirmar la identidad de la especie y detectar posibles eventos de contaminación cruzada a lo largo del tiempo. Cabe señalar que el perfil de repeticiones en tándem cortas (STR), el estándar de referencia para las líneas humanas, no es aplicable en este caso; para las líneas celulares no humanas, el código de barras de ADN del gen COX1 es el método establecido, y la línea 3T6 ha sido autenticada precisamente mediante ese método [2].

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Aplicaciones

Virología y expresión génica viral

Las células albinas suizas 3T6 han servido como un sistema huésped productivo para la investigación del poliomavirus durante varias décadas. Hyde-DeRuyscher y Carmichael utilizaron células 3T6 del NIH para realizar ensayos detallados de «nuclear run-on» y analizar la regulación temporal de la expresión génica del poliomavirus durante la infección productiva [3]. Su trabajo demostró que el cambio de la fase temprana a la tardía del poliomavirus no se regulaba a nivel del inicio de la transcripción. En cambio, dicho cambio se asoció con cambios en el procesamiento del ARN, un hallazgo que marcó de manera fundamental la comprensión de la regulación génica viral en los fibroblastos de ratón.

Rhee y Carmichael aprovecharon el sistema de infección NIH 3T6 para investigar la eficiencia de traducción de los ARNm tardíos del poliomavirus. Coinfectaron células con dos cepas virales que solo diferían en sus secuencias de exones líderes tardíos no codificantes 5' y aislaron polisomas en momentos tardíos de la infección [4]. Sus experimentos de perfilado de polisomas demostraron que la secuencia del líder tardío no influía en la eficiencia de traducción, lo que proporcionó una importante perspectiva mecánica sobre la utilización del ARNm viral.

En un estudio complementario, Chang y sus colegas identificaron una señal de localización nuclear (NLS) en la región C-terminal de la proteína VP2 de la cápside menor del poliomavirus utilizando dos estrategias convergentes [5]. En el enfoque genético «sustractivo», se transfectaron constructos de VP2 de longitud completa y truncados en células COS-7, lo que demostró que la eliminación de los residuos Glu307–Leu318 confinaba a la VP2 al citoplasma. El enfoque bioquímico «aditivo» se basó en células NIH 3T6: un péptido sintético correspondiente a esa secuencia se reticuló con albúmina sérica bovina e inmunoglobulina G, se marcó con fluorescencia y se microinyectó en el citoplasma de las células 3T6, donde ambos conjugados se acumularon en el núcleo, mientras que las proteínas portadoras no conjugadas no lo hicieron. La idoneidad de las células 3T6 para la microinyección citoplasmática fue, por lo tanto, fundamental para establecer el NLS.

Reparación del ADN y señalización de los factores de crecimiento

Las células 3T6 suizas albinas se han utilizado ampliamente para investigar la reparación de roturas de cadenas de ADN inducidas por radiación ionizante y el papel de los factores de crecimiento en la modulación de este proceso. Bildin, Seregina y Zhestyanikov examinaron la cinética de la reparación de roturas de una sola cadena (SSB) y de doble cadena (DSB) en células Swiss 3T6 expuestas a radiación ionizante en dosis de 5 a 10 Gy [6]. Utilizaron elución neutra y alcalina, junto con centrifugación en gradiente alcalino de sacarosa, para cuantificar las roturas de cadena. Sus hallazgos revelaron que la privación de suero reducía drásticamente las tasas de reparación, mientras que la reestimulación con factor de crecimiento epidérmico (EGF) e insulina las restauraba parcialmente, lo que estableció un vínculo directo entre la señalización mitogénica y la capacidad de reparación del daño al ADN.

Un estudio posterior realizado por Bil'din, Seregina y Zhestianikov amplió este trabajo al caracterizar las polimerasa de ADN específicas involucradas en la reparación de roturas de una sola cadena (SSB) inducidas por la radiación en células Swiss 3T6 en fase de proliferación, en reposo y estimuladas con mitógenos [7]. Al utilizar afidicolina, un inhibidor específico de las polimerasas de ADN alfa y delta, y 2',3'-didesoxitimidina-5'-trifosfato para inhibir la polimerasa de ADN beta, descubrieron que la reparación de las SSB era más sensible a la afidicolina, independientemente del estado proliferativo. La afidicolina inhibió la recuperación del ADN aproximadamente tres veces más eficazmente en las células en reposo y estimuladas con mitógenos que en las células en proliferación activa, lo que apunta a una polimerasa sensible a la afidicolina —muy probablemente la polimerasa alfa del ADN— como el paso que limita la reparación en las células en reposo.

En el ámbito del metabolismo de los nucleótidos, Tatibana y sus colegas estudiaron la estimulación mitogénica temprana del flujo metabólico a través del fosforibosil pirofosfato (PRPP) hacia los nucleótidos [8]. Trabajando principalmente con células Swiss 3T3, demostraron que el EGF más la insulina potenciaban el flujo a través del PRPP aproximadamente al doble y que la entrada de magnesio externo era necesaria para la respuesta. Se examinaron células Swiss 3T6 en reposo junto con fibroblastos fetales humanos y se observó una estimulación comparable de la síntesis de nucleótidos tras la exposición al suero, lo que situó a las 3T6 directamente dentro de la serie experimental e ilustró cómo se activa la biosíntesis de novo de purinas y pirimidinas como respuesta temprana a la estimulación mitogénica.

Regulación del ciclo celular y diferenciación

Un estudio pionero de Kleuser y Adam comparó directamente las células suizas 3T3 y 3T6 para investigar la relación entre el contenido de ARN ribosómico, el tamaño celular y la entrada al ciclo celular [9]. Sus hallazgos revelaron una distinción biológica fundamental entre las dos líneas: las células 3T3 requerían un nivel umbral de contenido de ARN ribosómico celular antes de reingresar al ciclo celular, mientras que las células 3T6 iniciaban la replicación del ADN sin un aumento sustancial del ARN ribosómico. Esta diferencia se interpretó como evidencia de que la transformación de las células 3T6 implicaba un desacoplamiento del punto de control de tamaño que normalmente rige la entrada al ciclo celular, lo que proporcionó una perspectiva mecánica sobre el fenotipo transformado de esta línea.

Thayer y sus colegas demostraron que la transfección del gen de determinación miogénica MyoD1 activa la expresión del gen endógeno MyoD1, lo que indica una autorregulación positiva [10]. El sistema experimental principal fue la línea 10T1/2, pero el efecto sobre el ARNm endógeno de MyoD1 se reprodujo en las células Swiss 3T6 —notablemente, la única línea adicional entre varias líneas de fibroblastos y adipoblastos analizadas en las que se observó—. Esa especificidad convierte a la 3T6 en un fondo permisivo informativo para estudios de conversión miogénica. El mismo trabajo mostró que MyoD1 y la miogenina participan en un bucle de autorregulación positiva, una contribución mecánica a la comprensión del compromiso miogénico publicada en *Cell*.

Chin y Liem utilizaron células Swiss 3T6, en paralelo con células L ^tk− de ratón, como huésped de transfección estable para estudiar la expresión de las proteínas de neurofilamentos de rata NF-L y NF-M en un contexto celular no neuronal [11]. Los cADN de los neurofilamentos fueron expresados mediante los promotores del virus SV40 y del virus del sarcoma de Rous, mientras que un promotor temprano del SV40 controlaba el marcador de selección de neomicina. Se recuperaron clones resistentes al G418 tanto con los constructos de NF-L como con los de NF-M, pero solo se pudieron establecer clones que expresaran NF-M detectable por inmunofluorescencia; la microscopía inmunoelectrónica mostró que NF-M se colocalizaba con la vimentina en los mismos filamentos intermedios. Por otra parte, González y sus colegas utilizaron fibroblastos de ratón Swiss 3T6 para caracterizar dos vías de señalización distintas mediadas por receptores de ATP que regulan la salida de calcio y la permeabilización de la membrana plasmática, demostrando una desensibilización selectiva entre las vías, lo cual concuerda con la existencia de múltiples purinoceptores en estas células [12].

Interacciones entre el huésped y el patógeno

Las células albinas 3T6-Swiss han demostrado ser un modelo in vitro eficaz para el estudio de patógenos bacterianos intracelulares, en particular Spiroplasma eriocheiris. Hou y sus colegas demostraron que S. eriocheiris podía invadir las células 3T6, formar cuerpos de inclusión e inducir vacuolización, tal como se observó mediante inmunofluorescencia y microscopía electrónica de transmisión [13]. La citometría de flujo y los ensayos de MTT confirmaron que la infección indujo apoptosis y redujo significativamente la viabilidad celular. Las bacterias infecciosas fueron detectables tan pronto como una hora después de la infección y aumentaron drásticamente a las 12 horas. El perfil de expresión emparejado de ARNm y microARN de las células 3T6 infectadas identificó 619 transcritos expresados de manera diferencial y 22 miARN expresados de manera diferencial después de seis horas, convergiendo en las vías de señalización de la adhesión focal y de la MAPK.

Los mecanismos moleculares de esta interacción se han analizado más a fondo en el mismo modelo celular. Hou y sus colegas identificaron una proteína similar a una adhesina (ALP) en la membrana externa de S. eriocheiris y demostraron que es necesaria para la infección de las células 3T6-Swiss albinas [14]. El cribado de doble híbrido en levadura, el far-western blotting y los experimentos de colocalización establecieron que la ALP se une al dominio EGF de la proteína de ratón fibulina-7, y que la ALP recombinante suprime la actividad de la vía del EGFR en las células 3T6 mediante la competencia con el EGF —un ejemplo llamativo de una proteína de superficie bacteriana que aprovecha un eje de factores de crecimiento del huésped. En un estudio complementario, Zhu y sus colegas caracterizaron una lisofosfolipasa de S. eriocheiris, señalando la capacidad del organismo para invadir y sobrevivir dentro de las células 3T6 de ratón, y demostraron mediante neutralización con anticuerpos que la enzima contribuye a la virulencia durante la fase temprana de la infección [15]. En conjunto, estos estudios establecen a las células 3T6-Swiss albino como un modelo mamífero reproducible para la investigación de la infección por Spiroplasma.

Evaluación de biomateriales y aplicaciones en biosensores

El crecimiento robusto y las características fibroblásticas de las células 3T6-Swiss albino las han convertido en un modelo útil para evaluar la biocompatibilidad de nuevos biomateriales. Rathinavel y sus colegas evaluaron nanoandamios compuestos electrohilados que contenían sílice mesoporosa (SBA-15), policaprolactona y curcumina para aplicaciones en la cicatrización de heridas [16]. Se evaluaron la migración celular, la proliferación y la biocompatibilidad en células 3T6-Swiss mediante ensayos de adhesión celular y de células vivas/muertas, lo cual complementó las pruebas antibacterianas y un modelo de herida in vivo en ratas. El estudio destacó la utilidad práctica de las células albinas 3T6-Swiss como plataforma de cribado para biomateriales candidatos a la cicatrización de heridas.

Más allá de las pruebas de materiales, las células 3T6-Swiss albinas se han empleado en la investigación de biosensores basados en células. Nicolini y sus colegas utilizaron un biosensor potenciométrico alterno (PAB) basado en silicio —una configuración de transductor sensible al pH y activable por luz— para monitorear las tasas de acidificación extracelular en tiempo real como indicador de la toxicidad de los fármacos [17]. Junto con hepatocitos primarios de rata y células de hepatoma HepG2 tratadas con mitoxantrona, los autores registraron cambios en la tasa de acidificación de los fibroblastos de ratón 3T6 tras el tratamiento con la citarabina (Ara-C), un antimetabolito del ADN, y compararon las lecturas del sensor con las obtenidas mediante microscopía óptica convencional, el rojo neutro y el azul de tripano. Esta línea celular resultó muy adecuada para estos experimentos debido a su actividad metabólica predecible y a la facilidad de su cultivo en sustratos sensoriales. En conjunto, estas aplicaciones demuestran que las células 3T6-Swiss albino ocupan un nicho útil en la investigación traslacional que une la biología celular y la ciencia de los materiales.

Conclusión

Las células albinas 3T6-Swiss (CVCL_0601) representan una línea celular de fibroblastos de ratón notablemente versátil e históricamente significativa. Establecida originalmente a partir de embriones de ratón suizo por Todaro y Green en 1963 mediante un régimen de transferencia de tres días a 6 × 10⁵ células por placa, la línea ha acumulado una extensa bibliografía que abarca la virología, la reparación del ADN, la biología del ciclo celular, la diferenciación miogénica, la señalización de receptores, las interacciones huésped-patógeno y la evaluación de biomateriales. Su rápido tiempo de duplicación, su susceptibilidad a la infección viral productiva y su capacidad de respuesta a los factores de crecimiento y a los mitógenos la convierten en un sistema modelo manejable y flexible desde el punto de vista experimental. Ya sea que el objetivo sea estudiar la transcripción del poliomavirus, investigar la reparación de roturas de cadenas de ADN inducidas por radiación reguladas por el EGF, evaluar la biocompatibilidad de nuevos andamios para la cicatrización de heridas o evaluar la patogénesis bacteriana intracelular, las células 3T6-Swiss albino ofrecen una plataforma experimental bien validada y reproducible. Los investigadores que deseen incorporar esta línea celular a sus programas pueden consultar las especificaciones completas del producto o solicitar las células 3T6-Swiss albino directamente en cytion.com.

Publicaciones clave

1. Todaro GJ, Green H (1963) Estudios cuantitativos del crecimiento de células embrionarias de ratón en cultivo y su desarrollo en líneas establecidas. The Journal of Cell Biology. PMID: 13985244
2. Lung O, Candlish R, Nebroski M, et al. (2021) Secuenciación de alto rendimiento para la autenticación de especies y la detección de contaminación en 63 líneas celulares. Scientific Reports. PMID: 34737324
3. Hyde-DeRuyscher R, Carmichael GG (1988) El cambio de fase temprana a tardía del poliomavirus no se regula a nivel de la iniciación de la transcripción y está asociado con cambios en el procesamiento del ARN. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. PMID: 2848251
4. Rhee E, Carmichael GG (1989) Eficiencias de traducción de las moléculas de ARNm tardías del poliomavirus que difieren en las secuencias de sus exones líderes tardíos no codificantes 5'. Journal of Virology. PMID: 2535746
5. Chang D, Haynes JI II, Brady JN, Consigli RA (1992) Identificación de una secuencia de localización nuclear en la proteína de la cápside VP2 del poliomavirus. Virology. PMID: 1333132
6. Bildin VN, Seregina TB, Zhestyanikov VD (1990) Efecto del factor de crecimiento epidérmico (EGF) y la insulina sobre la cinética de la reparación de lesiones en el ADN inducidas por la radiación. Acta Biologica Hungarica. PMID: 2094129
7. Bil'din VN, Seregina TB, Zhestianikov VD (1992) La regulación del proceso de reparación del ADN en células de mamíferos. IV. El papel de las ADN polimerasas en la regulación por el factor de crecimiento epidérmico de la reparación de roturas de ADN monocatenario inducidas por radiación ionizante en células de ratón Swiss 3T6. Tsitologiia (en ruso; resumen en inglés). PMID: 1295156
8. Tatibana M, Ishijima S, Kita K, et al. (1989) Estimulación mitogénica temprana del flujo metabólico a través del fosforibosilpirofosfato hacia los nucleótidos en células Swiss 3T3 y necesidad de magnesio externo para la respuesta. Advances in Enzyme Regulation. PMID: 2483026
9. Kleuser B, Adam G (1985) Interrelación entre el contenido celular de ARN ribosómico y la regulación del ciclo celular de líneas celulares normales y transformadas de ratón. Cell Biology International Reports. PMID: 3905022
10. Thayer MJ, Tapscott SJ, Davis RL, Wright WE, Lassar AB, Weintraub H (1989) Autorregulación positiva del gen de determinación miogénica MyoD1. Cell. PMID: 2546677
11. Chin SS, Liem RK (1989) Expresión de las proteínas de neurofilamentos de rata NF-L y NF-M en células no neuronales transfectadas. European Journal of Cell Biology. PMID: 2516804
12. González FA, Bonapace E, Belzer I, Friedberg I, Heppel LA (1989) Se pueden distinguir dos receptores distintos para el ATP en los fibroblastos de ratón Swiss 3T6 por su desensibilización. Biochemical and Biophysical Research Communications. PMID: 2818584
13. Hou L, Gu W, Zhu H, et al. (2017) Spiroplasma eriocheiris induce la apoptosis de las células albinas 3T6-Swiss de ratón, lo cual está asociado con el mecanismo de infección. Molecular Immunology. PMID: 28889064
14. Hou L, Liu Y, Gao Q, et al. (2017) La proteína similar a la adhesina (ALP) de Spiroplasma eriocheiris interactúa con proteínas del dominio del factor de crecimiento epidérmico (EGF) para facilitar la infección. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. PMID: 28184355
15. Zhu H, Liu P, Du J, et al. (2017) Identificación de la proteína lisofosfolipasa de Spiroplasma eriocheiris y verificación de su función. Microbiology (Reading). PMID: 27926815
16. Rathinavel S, Korrapati PS, Kalaiselvi P, Dharmalingam S (2021) Nanofibras de PCL/curcumina con sílice mesoporosa incorporada para su aplicación en la cicatrización de heridas. European Journal of Pharmaceutical Sciences. PMID: 34571179
17. Nicolini C, Lanzi M, Accossato P, et al. (1995) Un biosensor a base de silicio para pruebas de toxicidad en tiempo real en células hepáticas normales frente a células hepáticas cancerosas. Biosensors and Bioelectronics. PMID: 7576440