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B16-F10-Luc
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Haut
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Maus-Melanom

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B16-F10-Luc

Cell line · Artikelnummer 305658

B16-F10-Luc is a bioluminescent derivative of the B16-F10 murine melanoma cell line, which was originally established from a spontaneous melanoma arising ...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

B16-F10-Luc ist ein biolumineszentes Derivat der murinen Melanomzelllinie B16-F10, die ursprünglich aus einem spontanen Melanom einer C57BL/6-Maus etabliert wurde. Die Elternlinie B16-F10 wird aufgrund ihres hohen Metastasierungspotenzials und ihrer robusten, reproduzierbaren Transplantation in syngene C57BL/6-Wirte in der Krebsforschung weit verbreitet eingesetzt. In B16-F10-Luc-Zellen wurde ein Luciferase-Gen durch lentivirale Transduktion stabil unter der Kontrolle eines konstitutiv aktiven Promotors (üblicherweise EF-1α oder CMV) integriert, was zu einer hochgradigen, stabilen Luciferase-Expression über mehrere Passagen hinweg führt.

B16-F10-Luc-Zellen senden in Gegenwart eines Luciferin-Substrats ein biolumineszentes Signal aus, was eine nicht-invasive, quantitative In-vivo-Biolumineszenz-Bildgebung (BLI) von Tumorwachstum, Ausbreitung und Metastasierung in lebenden Tieren ermöglicht. Die Zelllinie eignet sich sowohl für subkutane als auch für intravenöse (experimentelle Metastasierung) Modelle in C57BL/6-Mäusen, wobei sich metastatische Kolonien bevorzugt in der Lunge bilden. Die Lumineszenzleistung ist linear proportional zur Anzahl lebensfähiger Zellen, was eine Echtzeit-Längsschnittüberwachung der Tumorlast ermöglicht, ohne dass die Tiere zu jedem Zeitpunkt getötet werden müssen. Die Luciferase-Expression verändert die Wachstumsdynamik von B16-F10-Zellen in vitro oder in vivo nicht signifikant.

Zu den wichtigsten Anwendungsbereichen gehören die Bewertung von Antitumormitteln, Immuntherapien und metastasierungshemmenden Wirkstoffen in syngenen Modellen sowie die quantitative pharmakodynamische Bildgebung in präklinischen onkologischen Studien.

Gewebe
Haut
Krankheit
Maus-Melanom

02Klassifizierung

Organismus
Maus
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This cell line contains a stably integrated firefly luciferase reporter cassette (Luc2, codon-optimized) introduced via replication-incompetent lentiviral transduction. The resulting polyclonal cell population was maintained under puromycin selection (1–5 µg/mL). S1 containment is required. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Gemisch aus spindelförmigen und epithelialen Zellen

04Bezeichner

Quellenangabe
B16-F10-Luc (Cytion-Katalognummer 305658)
NCBI-Steuer-ID
10090
Cellosaurus
CVCL_C8XU

05Expression und Anfälligkeit

Antigenexpression
Luc2 (Firefly, codonoptimiert)
Produkte
Melanin

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 bis 3 x 104 Zellen/cm²
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir vollständiges Wachstumsmedium + 10 % DMSO, um eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen zu gewährleisten.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Rasse / Unterart
C57BL/6