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B16-F10-Luc
Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma di topo

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B16-F10-Luc

Cell line · Codice prodotto 305658

B16-F10-Luc is a bioluminescent derivative of the B16-F10 murine melanoma cell line, which was originally established from a spontaneous melanoma arising ...

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01Informazioni generali

Descrizione

B16-F10-Luc è un derivato bioluminescente della linea cellulare murina di melanoma B16-F10, originariamente ottenuta da un melanoma spontaneo insorto in un topo C57BL/6. La linea parentale B16-F10 è ampiamente utilizzata nella ricerca sul cancro grazie al suo elevato potenziale metastatico e al suo attecchimento robusto e riproducibile in ospiti singeneici C57BL/6. Nelle cellule B16-F10-Luc, un gene della luciferasi è stato integrato in modo stabile sotto il controllo di un promotore costitutivamente attivo (comunemente EF-1α o CMV) mediante trasduzione lentivirale, determinando un'espressione stabile e ad alto livello della luciferasi attraverso i passaggi.

Le cellule B16-F10-Luc emettono un segnale bioluminescente in presenza di un substrato luciferina, consentendo l'imaging bioluminescente (BLI) in vivo, non invasivo e quantitativo, della crescita tumorale, della disseminazione e delle metastasi in animali vivi. La linea è adatta sia per modelli sottocutanei che endovenosi (metastasi sperimentali) in topi C57BL/6, con colonie metastatiche che si formano preferenzialmente nei polmoni. L'emissione di luminescenza è linearmente proporzionale al numero di cellule vitali, consentendo il monitoraggio longitudinale in tempo reale del carico tumorale senza il sacrificio degli animali in ogni momento. L'espressione della luciferasi non altera in modo significativo la cinetica di crescita in vitro o in vivo delle cellule B16-F10.

Le applicazioni principali includono la valutazione di agenti antitumorali, immunoterapie e composti inibitori delle metastasi in modelli singeneici, nonché l'imaging farmacodinamico quantitativo negli studi oncologici preclinici.

Tessuto
La pelle
Malattia
Melanoma di topo

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This cell line contains a stably integrated firefly luciferase reporter cassette (Luc2, codon-optimized) introduced via replication-incompetent lentiviral transduction. The resulting polyclonal cell population was maintained under puromycin selection (1–5 µg/mL). S1 containment is required. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Miscela di cellule a forma di fuso e cellule simili a quelle epiteliali

04Identificatori

Riferimento bibliografico
B16-F10-Luc (codice catalogo Cytion 305658)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_C8XU

05Espressione e suscettibilità

Espressione dell'antigene
Luc2 (lucciola, ottimizzata a livello di codoni)
Prodotti
Melanina

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
Da 1 a 3 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Controllo di qualità e crioconservazione

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo + 10% DMSO per ottenere un'adeguata vitalità post-scongelamento.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
C57BL/6